(96 pozzetti) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit - SYBR Green I
Descrizzioni
U(96-beni) QuickEasyTM Kit Cell Direct RT-qPCR–SYBR Green Ifurnisceun sistema unicu di buffer di lisito libera rapidamente l'RNAda cellule in colturacampioni per reazzioni RT-qPCR, eliminendu u tempu è laboriosuPrucessu di purificazione di RNA, è piglia solu 7 minuti per ottene u mudellu di RNA necessariu.U5× RT Mix direttuè2 × qPCR Mix-SYBR direttafurnitu in a scatula pò rapidamente èeffittivamenti ottene quantitative in tempu realeI risultati PCR.
5 × Direct RT Mix è 2 × Direct qPCR Mix-SYBR anu una forte tolleranza di l'inibitore, è ponu utilizà u lisatu di u campione per esse pruvatu cum'è mudellu per una trascrizione inversa efficiente è amplificazione specifica.U reattivu cuntene Foregene Reverse Transcriptase unica cù alta affinità per l'RNA, è ancu Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , buffer di reazione, ottimisatore di PCR è stabilizzatore, è pò esse usatu in cunjunzione cù u buffer di lisi per detectà a mostra rapidamente, facilmente è precisamente, è hà e caratteristiche di alta sensibilità, forte specificità è bona stabilità.
U kit hè destinatu à a lisi di u micro-sistema di e cellule cultivate 96 bè, è hà una bona uniformità è cunsistenza;i cumpunenti di u kit furniscenu 96 reazioni di lisi, 96 reazioni di trascrizione inversa è 96 × 2 reazioni qPCR, chì ponu scuntrà a piastra di cellule 96 pozzi per un usu una volta, evitendu a contaminazione causata da l'apertura ripetuta, u congelamentu è u scongelu di reagenti è a degradazione di u rendiment di reagenti.
Cumpunenti di u kit
| Cumpusizioni di u kit ( 50 μL sistema di lisi / 20 μlRT sistema di reazzione /20μL sistema di reazione qPCR) | DRT-03011 | Rimarca | |
| 96T | |||
| PartI | BufferCL | 5 ml | CellLisi |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Part II | DNAEraser | 100 μL | |
| 5× RT Mix direttu | 400 μL | RT | |
| 2× Mix qPCR diretta-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50 × ROX Reference Dye | 400µL | ||
| RNase- GratuituddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mannuale | 1 pezzu | 1 porzione | |
*: U reattivu di lisi DNA Eraser hè inclusu in a Parte II di u kit;Cell Lysis, RT, è i cumpunenti qPCR ponu esse acquistati separatamente.
Caratteristiche è vantaghji
■Semplice è efficace: cù a tecnulugia Cell Direct RT, i campioni di RNA ponu esse ottenuti in solu 7 minuti.
■ A dumanda di mostra hè chjuca, quant'è 10 cellule ponu esse pruvati.
■ High throughput: pò detect rapidamente RNA in cellule cultivate in 384, 96, 24, 12, 6-well plates.
■ DNA Eraser pò sguassà rapidamente i genomi liberati, riducendu assai l'impattu nantu à i risultati sperimentali successivi.
■ U sistema RT è qPCR ottimisatu rende a trascrizione inversa RT-PCR in dui passi più efficace è a PCR più specifica, è più resistente à l'inibitori di a reazione RT-qPCR.
Applicazione di kit
Campo d'applicazione: cellule in coltura.
- RNA liberatu da a lisi di campioni: applicabile solu à u mudellu RT-qPCR di stu kit.
- U kit pò esse usatu per i seguenti scopi: analisi di l'espressione genica, verificazione di l'effettu di silenziu di u genu mediatu da siRNA, screening di droga, etc.
Stoccaggio e vita di conservazione
A parte I di stu kit deve esse guardatu à 4℃;Part II deve esse guardatu à -20 ℃.
Foregene Protease Plus II deve esse conservatu à 4℃, ùn congelate micca à -20 ℃.
Reagente 2×Direct qPCR Mix-Taqman deve esse guardatu à -20℃in u bughju;s'ellu si usa spessu, pò ancu esse guardatu à 4℃ per u almacenamentu di corta durazione (utilizate in 10 ghjorni).
Principii di design di primer PCR in tempu reale
Prima prima è prima inversa
Per a PCR in Tempu Reale, u disignu di primer hè assai impurtante.I primers sò ligati à a specificità è l'efficienza di l'amplificazione PCR, è ponu esse designati cun riferimentu à i seguenti principii:
- Lunghezza di prima: 18-30bp.
- cuntenutu GC: 40-60%.
- Valore Tm: U software di cuncepimentu di Primer, cum'è Primer 5, pò dà u valore Tm di u primer.Les valeurs de Tm des amorces en amont et en aval doivent être les plus proches possibles.A formula di calculu Tm pò ancu esse usata: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Quandu si esegue a PCR, una temperatura sottu à u valore Tm di l'amorce di 5 ° C hè generalmente sceltu cum'è a temperatura di annealing (l'aumentu currispundente di a temperatura di annealing pò aumentà a specificità di a reazione PCR).
- Primers è prudutti PCR:
- A durata di u pruduttu di amplificazione di u primu di cuncepimentu PCR hè preferibile 100-150bp.
- I primi di cuncepimentu in l'area strutturale secundaria di u mudellu deve esse evitata quant'è pussibule.
- Evitate a furmazione di 2 o più basi cumplementarii trà l'estremità 3' di i primers upstream è downstream.
- Primer 3′ base terminale ùn pò esse presente cù 3 G o C consecutivi supplementari.
- I primers stessi ùn ponu micca strutture cumplementarii, altrimenti una struttura di hairpin serà furmatu, affettendu l'amplificazione di PCR.
- ATCG deve esse distribuitu u più uniformemente pussibule in a sequenza di primer, è a basa terminale 3′ deve esse evitata cum'è T.
Appendice1: Cu direttuRT-qPCR Cumpunente di u kitt pacchettu supplementu
1.Cell Lysis Solution
| Soluzione di lisi cellulare | |||
| Cumpunenti di u kit (sistema di lisi di 24 pozzi / pozzu) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| PartI | tampon CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| tampon ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PartII | Gomma di DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Cumpunenti di u kit (sistema di reazione 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× RT Mix direttu | 800 μl |
| DdH senza RNase2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Cumpunenti di u kit (sistema di reazione 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× qPCR Mix-Taqman diretta | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl |
| DdH senza RNase2O | 1,7 ml | 10 ml |
Manuali d'istruzzioni:
