Cell Direct RT qPCR Kit - SYBR GREEN I Cell Direct Lisis Cell Ready Kit qRT-PCR in una fase
Descrizzioni
Stu kit usa un sistema di buffer di lisi unicu chì pò liberà rapidamente RNA da campioni di cellule cultivate per reazioni RT-qPCR, eliminendu cusì u prucessu di purificazione di RNA laborioso è laborioso.U mudellu RNA pò esse acquistatu in solu 7 minuti.U 5×Direct RT Mix è 2×I reagenti diretti qPCR Mix-SYBR furniti da u kit ponu ottene risultati PCR quantitativi in tempu reale rapidamente è efficace.
5×Direct RT Mix è 2×Direct qPCR Mix-SYBR anu una forte tolleranza à l'inhibitore, è u lisatu di i campioni pò esse usatu cum'è mudellu per RT-qPCR direttamente.Stu kit cuntene l'unica trascrittasi inversa Foregene di alta affinità RNA, è Hot D-Taq DNA polimerasi, dNTPs, MgCl2, buffer di reazione, ottimizzatore di PCR è stabilizzatore.
Specificazioni
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Cumpunenti di u kit
| Parte I | tampon CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| tampon ST | |
| Parte II | Gomma di DNA |
| 5× RT Mix direttu | |
| 2 × qPCR Mix-SYBR diretta | |
| 50 × ROX Reference Dye | |
| DdH2O senza RNasi | |
| Istruzzioni | |
Caratteristiche è vantaghji
■Semplice è efficace: cù a tecnulugia Cell Direct RT, i campioni di RNA ponu esse ottenuti in solu 7 minuti.
■ A dumanda di mostra hè chjuca, quant'è 10 cellule ponu esse pruvati.
■ High throughput: pò detect rapidamente RNA in cellule cultivate in 384, 96, 24, 12, 6-well plates.
■ DNA Eraser pò sguassà rapidamente i genomi liberati, riducendu assai l'impattu nantu à i risultati sperimentali successivi.
■ U sistema RT è qPCR ottimisatu rende a trascrizione inversa RT-PCR in dui passi più efficace è a PCR più specifica, è più resistente à l'inibitori di a reazione RT-qPCR.
Applicazione di kit
Campo d'applicazione: cellule in coltura.
- RNA liberatu da a lisi di campioni: applicabile solu à u mudellu RT-qPCR di stu kit.
- U kit pò esse usatu per i seguenti scopi: analisi di l'espressione genica, verificazione di l'effettu di silenziu di u genu mediatu da siRNA, screening di droga, etc.
Diagramu
Stoccaggio e vita di conservazione
A parte I di stu kit deve esse guardatu à 4 ℃;Part II deve esse guardatu à -20 ℃.
Foregene Protease Plus II deve esse conservatu à 4℃, ùn congelate micca à -20 ℃.
Reagente 2×Direct qPCR Mix-SYBR deve esse guardatu à -20℃in u bughju;s'ellu si usa spessu, pò ancu esse guardatu à 4℃ per u almacenamentu di corta durazione (utilizate in 10 ghjorni).
Principii di design di primer PCR in tempu reale
Prima prima è prima inversa
Per a PCR in Tempu Reale, u disignu di primer hè assai impurtante.I primers sò ligati à a specificità è l'efficienza di l'amplificazione PCR, è ponu esse designati cun riferimentu à i seguenti principii:
Lunghezza di prima: 18-30bp.
cuntenutu GC: 40-60%.
Valore Tm: U software di cuncepimentu di Primer, cum'è Primer 5, pò dà u valore Tm di u primer.Les valeurs de Tm des amorces en amont et en aval doivent être les plus proches possibles.A formula di calculu Tm pò ancu esse usata: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Quandu si esegue a PCR, una temperatura sottu à u valore Tm di l'amorce di 5 ° C hè generalmente sceltu cum'è a temperatura di annealing (l'aumentu currispundente di a temperatura di annealing pò aumentà a specificità di a reazione PCR).
Primers è prudutti PCR:
A durata di u pruduttu di amplificazione di u primu di cuncepimentu PCR hè preferibile 100-150bp.
I primi di cuncepimentu in l'area strutturale secundaria di u mudellu deve esse evitata quant'è pussibule.
Evitate a furmazione di 2 o più basi cumplementarii trà l'estremità 3' di i primers upstream è downstream.
Primer 3′ base terminale ùn pò esse presente cù 3 G o C consecutivi supplementari.
I primers stessi ùn ponu micca strutture cumplementarii, altrimenti una struttura di hairpin serà furmatu, affettendu l'amplificazione di PCR.
ATCG deve esse distribuitu u più uniformemente pussibule in a sequenza di primer, è a basa terminale 3′ deve esse evitata cum'è T.
Appendice 1: Pack di supplementu di cumpunenti Cell Direct RT-qPCR Kit
1.Soluzione di lisi cellulare
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| Cumpunenti di u kit (sistema di lisi di 24 pozzi / pozzu) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| PartI | tampon CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| tampon ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PartII | Gomma di DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
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| Cumpunenti di u kit (sistema di reazione 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× RT Mix direttu | 800 μl |
| DdH senza RNase2O | 1,7 ml × 2 |
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| ||
| Cumpunenti di u kit (sistema di reazione 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × qPCR Mix-SYBR diretta | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50 × ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl |
| DdH senza RNase2O | 1,7 ml | 10 ml |
Manuali d'istruzzioni:
