Spiegazione di i termini basi di a biologia moleculare
1. cDNA è cccDNA: cDNA hè un DNA à doppia fila sintetizatu da a transcriptase inversa da mRNA;cccDNA hè un plasmide DNA circular chjusu a doppia catena libera da u cromosoma.
2. Unità di plegamentu standard: l'unità di struttura secundaria di a proteina α-helix è β-sheet ponu formate blocchi strutturali cù arrangiamenti geomettichi speciali attraversu vari polipeptidi di cunnessione.Stu tipu di plegamentu determinatu hè di solitu chjamatu superstruttura secundaria.Quasi tutti i strutturi terziarii ponu esse discrittu da sti tipi di plegamentu, è ancu i so tipi cumminati, cusì sò ancu chjamati unità di plegamentu standard.
3. CAP: adenosina monofosfatu ciclicu (cAMP) a proteina di u receptore CRP (proteina di u receptore cAMP), u cumplessu furmatu dopu à a cumminazione di cAMP è CRP hè chjamatu attivazione di proteina CAP (proteina attivata cAMP)
4. Sequenza palindromica: A sequenza cumplementaria inversa di un segmentu di un fragmentu di DNA, spessu un situ di l'enzima di restrizzione.
5. micRNA: RNA interferente cumplementariu o RNA antisensu, chì hè cumplementarii à a sequenza di mRNA è pò impedisce a traduzzione di mRNA.
6. Ribozyme: RNA cù attività catalitica, chì ghjoca un rolu autocatalytic in u prucessu di splicing di RNA.
7. Motif: Ci sò alcune regioni lucali cù forma tridimensionale simili è topologia in a struttura spaziale di e molécule di prutezione
8. Signal peptide: un peptide cù 15-36 residues d'aminoacidu à u N-terminale durante a sintesi di prutezione, chì guida a transmembrana di a proteina.
9. Attenuator: Una sequenza di nucleotidi trà una regione di l'operatore è un genu strutturale chì termina a transcription.
10. Magic Spot: Quandu a bacteria cresce è scontra una mancanza cumpleta di aminoacidi, i battìri pruduceranu una risposta d'urgenza per piantà l'espressione di tutti i geni.I signali chì generanu sta risposta d'urgenza sò guanosina tetrafosfatu (ppGpp) è guanosina pentafosfatu (pppGpp).U rolu di PpGpp è pppGpp ùn hè micca solu unu o uni pochi operoni, ma affetta un gran numaru di elli, cusì sò chjamati super-regulatori o spots magichi.
11. Elementu promotore upstream: si riferisce à a sequenza di DNA chì ghjoca un rolu regulatori in l'attività di u promotore, cum'è TATA in a regione -10, TGACA in a regione -35, enhancers, è attenuators.
12. Sonda di DNA: un segmentu marcatu di DNA cù una sequenza cunnisciuta, chì hè largamente utilizata per detectà sequenze scunnisciute è genes target screen.
13. Sequenza SD: Hè a sequenza di ubligatoriu di ribosoma è mRNA, chì regula a traduzzione.
14. Anticorpu monoclonale : un anticorpu chì agisce solu contr'à un determinante antigenic unicu.
15. Cosmid: Hè un vettore di DNA esogenu custruitu artificialmente chì mantene e regioni COS à i dui estremità di u fage è hè cunnessu cù u plasmide.
16. Blue-white spot screening: gene LacZ (coding β-galactosidase), l'enzyme pò decompose u sustrato chromogenic X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) per pruduce u turchinu, facendu cusì u strain blue.Quandu l'ADN esogenu hè inseritu, u genu LacZ ùn pò micca esse spressu, è a ceppa hè bianca, in modu di screening the bacteria recombinant.Questu hè chjamatu screening blu-biancu.
17. Elementu Cis-attu: Una sequenza specifica di basi in DNA chì regula l'espressione genica.
18. Enzyme Klenow: Frammentu grande di DNA polimerasi I, salvu chì l'attività di esonucleasi 5' 3' hè eliminata da l'oloenzima DNA polimerasi I.
19. Anchored PCR : usatu per amplificà l'ADN d'interessu cù una sequenza cunnisciuta à una estremità.Una coda poly-dG hè stata aghjunta à una estremità di a sequenza scunnisciuta, è dopu u poly-dC è a sequenza cunnisciuta sò stati usati com'è primers per l'amplificazione PCR.
20. Proteina di fusione: U genu di a proteina eucariota hè cunnessu cù u genu esogenu, è a proteina cumposta da a traduzzione di a proteina di u gene originale è a proteina esogena hè espressa à u stessu tempu.
Altri termini di biologia moleculare
1. U mapu fisicu di l'ADN hè l'ordine in quale i frammenti (restriction endonuclease-digested) di a molécula di DNA sò disposti.
2. U clivage di RNase hè divisu in dui tipi (autocatalysis) è (heterocatalysis).
3. Ci sò trè fatturi d'iniziu in procarioti sò (IF-1), (IF-2) è (IF-3).
4. I proteini transmembrana necessitanu guida (peptidi di signale), è u rolu di i chaperoni di a proteina hè (aiuta à plegà a catena di peptide in a conformazione nativa di a proteina).
5. Elementi in i promotori pò esse generalmente divisu in dui tipi: (elementi promotori core) è (elementi promotori upstream).
6. U cuntenutu di ricerca di a biologia moleculare include principalmente trè parte: (biologia moleculare strutturale), (espressione genica è regulazione), è (tecnologia di recombinazione di DNA).
7. I dui esperimenti chjave chì dimustranu chì l'ADN hè u materiale geneticu sò (infezzione di pneumococcus di i topi) è (infezzione di phage T2 di Escherichia coli).potenziale).
8. Ci hè dui differenzi principali trà hnRNA è mRNA: (hnRNA hè spliced in u prucessu di cunvertisce in mRNA), (l'estremità 5' di l'mRNA hè aghjuntu cù un capu m7pGppp, è ci hè una poliadenilazione extra à l'estremità 3' di l'acidu mRNA (polyA) tail).
9. I vantaghji di a forma multi-subunità di a proteina sò (a subunità hè un metudu ecunomicu per l'utilizazione di l'ADN), (pò riduce l'impattu di l'errori aleatorii in a sintesi di prutezione nantu à l'attività di a proteina), (l'attività pò esse assai efficace è rapidamente sò aperti è chjusi).
10. U cuntenutu principali di prutiìni folding mecanismu prima tiurìa nucleation include (nucleation), (arricchimentu strutturale), (rearrangement finali).
11. Galactose hà un effettu duale nantu à i batteri;da una banda (pò esse usatu cum'è fonte di carbone per a crescita di e cellule);da l'altra banda (hè ancu un cumpunente di u muru cellulare).Dunque, un promotore S2 indipendente di cAMP-CRP hè necessariu per a sintesi permanente à u livellu di fondu;à u listessu tempu, un promotore S1 dipendente da cAMP-CRP hè necessariu per regulà a sintesi d'altu livellu.A trascrizzione parte da (S2) cù G è da (S1) senza G.
12. A tecnulugia di l'ADN recombinante hè ancu cunnisciuta cum'è (clonazione genetica) o (clonazione molecular).U scopu ultimu hè (di trasfiriri l'infurmazione genetica DNA in un urganismu in un altru urganismu).Un esperimentu tipicu di ricombinazione di DNA include generalmente i seguenti passi: (1) Estrae u genu di destinazione (o genu esogenu) di l'organismu donatore, è cunnetta enzimaticamente à una altra molécula di DNA (vettore di clonazione) per furmà una nova molécula di DNA recombinante.② A molécula di DNA recombinante hè trasferita in a cellula destinataria è replicata in a cellula destinataria.Stu prucessu hè chjamatu trasfurmazioni.③ Scuprite è identificà e cellule destinatarie chì anu assorbutu l'ADN recombinante.④Cultivate e cellule chì cuntenenu DNA recombinante in grande quantità per detectà se u genu di l'aiutu straneru hè spressu.
13. Ci sò dui tipi di replicazione di plasmidi: quelli chì sò strettamente cuntrullati da a sintesi di a proteina di l'ospiti sò chjamati (plasmidi stretti), è quelli chì ùn sò micca strettamente cuntrullati da a sintesi di a proteina di l'ospiti sò chjamati (plasmidi rilassati).
14. U sistema di reazzione PCR deve avè i seguenti cundizioni: a.Primers DNA (circa 20 basi) cù sequenze cumplementarii à ogni estremità di i dui filamenti di u genu di destinazione da esse separati.b.Enzymes cù stabilità termale cum'è: TagDNA polymerase.c, dNTPd, sequenza di DNA d'interessu cum'è mudellu
15. U prucessu di reazzione basica di a PCR include trè fasi: (denaturazione), (annealing) è (estensione).
16. U prucessu di basa di l'animali transgenici di solitu include: ①Introduzione di geni straneri clonati in u nucleu di un ovu fecundatu o cellula staminali embrionali;②Trasplante di l'ovu fecundatu inoculatu o di a cellula staminale embrionale in l'utru femminile;③Sviluppu è crescita embrionale cumpletu Per a prole cù genes stranieri;④ Aduprate questi animali chì ponu pruduce proteini stranieri cum'è splutazioni per allevà novi linee omozigote.
17. I linii cellulari di l'hibridoma sò generati da l'hibridizing (spleen B) cells with (myeloma) cells, è postu chì (spleen cells) ponu utilizà l'ipoxantina è (cellu di l'osse) furnisce funzioni di divisione cellula, ponu esse cultivati in HAT medium.cresce.
18. Cù l'approfondimentu di a ricerca, a prima generazione di anticorpi hè chjamata (anticorpi policlonali), a seconda generazione (anticorpi monoclonali), è a terza generazione (anticorpi di ingegneria genetica).
19. Attualmente, l'ingenieria genetica di i virus di l'insetti hè principarmenti focu annantu à u baculovirus, chì si manifesta in l'intruduzioni di (genu di toxina esogenu);(geni chì disturbanu u ciculu di vita normale di l'insetti);(mudificazione di i geni di virus).
20. I fatturi di a proteina trans-acting chì currispondenu à l'elementi cumuni TATA, GC è CAAT in u promotore di l'RNA polimerasi II di mammiferi sò (TFIID), (SP-1) è (CTF / NF1), rispettivamente.
vinti unu.I fatturi di trascrizione basi di l'RNA polimerasi Ⅱ sò, TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, è a so sequenza di legame hè: (D, A, B, E).Induve a funzione di TFII-D hè (binding to TATA box).
vinti dui.A maiò parte di i fatturi di trascrizzione chì si liganu à l'ADN funzionanu in forma di dimeri.I duminii funziunali di i fatturi di trascrizzione chì si liganu à l'ADN sò cumunamenti i seguenti (helix-turn-helix), (motivu di dita di zincu), (basic-leucine) zipper motif).
vinti trè.Ci sò trè tippi di modi di clivamentu di l'endonucleasi di restrizione: (tagliate à u latu 5' di l'assi di simmetria per generà estremità appiccicose 5'), (tagliate à u latu 3' di l'assi di simmetria per generà estremità aderenti 3' (tagliate à l'asse di simmetria per generà segmenti piani)).
vinti quattru.L'ADN plasmidicu hà trè cunfigurazioni diverse: (configurazione SC), (configurazione oc), (configurazione L).U primu in l'elettroforesi hè (configurazione SC).
25. Sistemi di spressione genica esogenu, principarmenti (Escherichia coli), (Yeast), (Insect) è (Tavola di cellula di mammiferi).
26. I metudi cumunimenti utilizati per l'animali transgenici sò: (metudu d'infezzione retrovirale), (metudu di microinjection DNA), (metudu di cellule staminali embrionali).
Applicazione Biologia Molecular
1. Nominate e funzioni di più di 5 RNA ?
Trasferire RNA tRNA Trasferire amminoacidi Ribosoma RNA rRNA Ribosoma costituisce RNA messaggero mRNA Modello di sintesi di proteine RNA nucleare eterogeneo hnRNA Precursore di mRNA maturo piccolo RNA nucleare snRNA Implicato nello splicing di hnRNA Piccolo RNA citoplasmatico scRNA/7SL-RNA proteina Componenti di sintesi plasmatica reticulum-RNA e RNA sintesi di reticulum-localizzate Componenti di sintesi di RNA regolati/localizzati espressione Ribozima RNA RNA enzimaticamente attivu
2. Chì ghjè a principal diferenza trà i prumutori procarioti è eucarioti ?
Procariota TTGACA --- TATAAT------Initiation Site-35 -10 Eucariotic Enhancer---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Initiation Site-110 -70 -25
3. Chì sò i principali aspetti di a custruzzione artificiale di i plasmidi naturali ?
I plasmidi naturali sò spessu difetti, per quessa ùn sò micca adattati per l'usu cum'è trasportatori per l'ingenieria genetica, è deve esse mudificatu è custruitu: a.Aghjunghjite i geni di marcatori di selezzione adattati, cum'è dui o più, chì sò faciuli d'utilizà per a selezzione, generalmente geni antibiotici.b.Aumentà o diminuite i siti di taglio di l'enzima adattati per facilità a ricombinazione.c.Accurtà a lunghezza, tagliate i frammenti inutili, migliurà l'efficienza di l'impurtazione è aumentanu a capacità di carica.d.Cambia u replicon, da strettu à scioltu, da menu copie à più copie.e.Aghjunghjite elementi genetichi speciali secondu i bisogni speciali di l'ingenieria genetica
4. Dà un esempiu di un metudu per u screening differenziale di cDNA specificu di tissutu?
Dui pupulazioni di cellule sò preparate, u genu di destinazione hè spressu o altamente spressu in una di e cellule, è u genu di destinazione ùn hè micca spressu o pocu spressu in l'altra cellula, è dopu u genu di destinazione hè truvatu per hibridazione è paraguni.Per esempiu, durante l'occurrence è u sviluppu di i tumuri, e cellule tumorali presentanu mRNA cù livelli d'espressione differenti da e cellule normali.Dunque, i geni ligati à u tumore ponu esse schermati da l'ibridazione differenziale.U metudu d'induzione pò ancu esse usatu per scacciate i geni chì l'espressione hè indotta.
5. Generazione è screening di e linee di cellula hibridoma ?
Spleen B cells + myeloma cells, aghjunghje polyethylene glycol (PEG) per prumove a fusione di e cellule, è e cellule di fusione splenic B-myeloma cultivate in HAT medium (contene hypoxanthine, aminopterin, T) cuntinueghjanu à espansione nutriscia.A fusione di e cellule cuntene : cellule di fusione di spleen-spleen : incapaci à cultivà, e cellule di spleen ùn ponu micca cultivate in vitro.Cellule di fusione di l'ossu: ùn ponu micca aduprà l'ipoxantina, ma ponu sintetizà a purina attraversu a seconda via cù folate reductase.L'aminopterina inibisce a folate reductase è cusì ùn pò micca cresce.Cellule di fusione di l'osse-spleen: ponu cresce in HAT, e cellule di spleen ponu utilizà l'ipoxantina, è e cellule di l'osse furnisce a funzione di divisione cellulare.
6. Chì hè u principiu è u metudu di determinà a struttura primaria di l'ADN da u metudu di terminazione di dideoxy (metu Sanger) ?
U principiu hè di utilizà un terminatore di a catena di nucleotide-2,,3,-dideoxynucleotide per finisce l'estensione di DNA.Siccomu ùn manca u 3-OH necessariu per a furmazione di ligami 3/5/fosfodiester, una volta incorporata in a catena di DNA, a catena di DNA ùn pò esse più allargata.Sicondu u principiu di l'accoppiamentu di basa, ogni volta chì l'ADN polimerasi hà bisognu di dNMP per participà à a catena d'ADN nurmalmente estesa, ci sò duie pussibulità, una hè di participà à ddNTP, chì risultatu in a terminazione di l'estensione di a catena di deoxynucleotide;l'altru hè di participà à dNTP , perchè a catena di DNA pò ancu cuntinuà à estenderà finu à chì u prossimu ddNTP hè incorporatu.Sicondu stu metudu, un gruppu di frammenti di DNA di diverse lunghezze chì finiscinu in ddNTP pò esse acquistatu.U metudu hè di dividisce in quattru gruppi rispettivamente ddAMP, ddGMP, ddCMP è ddTMP.Dopu à a reazione, l'elettroforesi in gel di poliacrilamide pò leghje a sequenza di DNA secondu e bande di natazione.
7. Chì ghjè l'effettu di regulazione pusitiva di a proteina attivatore (CAP) nantu à a trascrizzione?
Adenylate ciclicu (cAMP) receptor protein CRP (cAMP receptor protein), u cumplessu furmatu da a cumminazzioni di cAMP è CRP hè chjamatu CAP (cAMPactivated protein).Quandu E. coli hè cultivatu in un mediu senza glucose, a sintesi di CAP aumenta, è CAP hà a funzione di attivazione di i promotori cum'è lactose (Lac).Certi promotori CRP-dipendenti mancanu a caratteristica tipica di sequenza di regione -35 (TTGACA) chì i promotori cumuni anu.Dunque, hè difficiule per l'RNA polimerasi di ligà à questu.A prisenza di CAP (funzione): pò migliurà significativamente a constante di ubligatoriu di l'enzima è u promotore.Si mostra principalmente i seguenti dui aspetti: ① CAP aiuta a molécula di l'enzyme à orientà currettamente cambiendu a conformazione di u promotore è l'interazzione cù l'enzyme, in modu di cumminà cù a regione -10 è ghjucà u rolu di rimpiazzà a funzione di a regione -35.②CAP pò ancu inibisce u ligame di l'RNA polimerasi à altri siti in l'ADN, aumentendu cusì a probabilità di ligà à u so promotore specificu.
8. Chì passi sò generalmente inclusi in un esperimentu tipicu di recombinazione di DNA ?
a.Estratte u genu di destinazione (o genu esogenu) di l'organismu donatore, è cunnette enzimaticamente à un'altra molécula di DNA (vettore di clonazione) per furmà una nova molécula di DNA recombinante.b.Trasferisce a molécula di DNA recombinante in a cellula receptora è replicate è cunservala in a cellula destinataria.Stu prucessu hè chjamatu trasfurmazioni.c.Scuprite è identificà e cellule receptore chì anu assorbutu l'ADN recombinante.d.Cultiva in massa e cellule chì cuntenenu l'ADN recombinante per detectà se u genu di l'aiutu straneru hè spressu.
9. Custruzzione di a biblioteca di geni Trè metudi di screening di recombinants sò datu è u prucessu hè brevemente descrittu.
Screening di resistenza à l'antibioticu, inattivazione insertiva di resistenza, screening spot blu-biancu o screening PCR, screening differenziale, sonda DNA A maiò parte di i vettori di clonazione portanu geni di resistenza à l'antibiotici (anti-ampicillin, tetracycline).Quandu u plasmid hè trasferitu in Escherichia coli, i battìri acquistanu resistenza, è quelli senza trasferimentu ùn anu micca resistenza.Ma ùn pò micca distingue s'ellu hè statu riurganizatu o micca.In un vettore chì cuntene dui geni di resistenza, se un fragmentu di DNA straneru hè inseritu in unu di i geni è face chì u genu sia inattivatu, dui cuntrolli di platti chì cuntenenu diverse droghe pò esse usatu per screening per recombinants pusitivi.Per esempiu, u plasmide pUC cuntene u genu LacZ (coding β-galactosidase), chì pò scumpressà u sustrato cromogenicu X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) per pruduce blu, turnendu cusì a ceppa blu.Quandu l'ADN straneru hè inseritu, u genu LacZ ùn pò micca esse spressione, è a cepa hè bianca, in modu di scuperta a bacteria recombinante.
10. Spiegà u prucessu di basa di ottene l'animali transgenici per mezu di e cellule staminali embrionali ?
E cellule staminali embrionali (ES) sò cellule embrionali durante u sviluppu embrionicu, chì ponu esse cultivate è proliferate artificialmente è anu a funzione di differenzià in altri tipi di cellule.Cultura di cellule ES: a massa cellulare interna di a blastocisti hè isolata è coltivata.Quandu l'ES hè cultivatu in una strata senza alimentatore, si differenziarà in diverse cellule funzionali cum'è e cellule muscolari è cellule N.Quandu hè cultivatu in un mediu chì cuntene fibroblasti, ES mantene a funzione di differenziazione.ES pò esse genetically manipulated, è a so funzione di differenziazione pò esse integrata senza affettà a so funzione di differenziazione, chì risolve u prublema di integrazione aleatoria.Introduce i geni esogeni in cellule staminali embrionali, poi implantate in l'utru di topi femminili incinte, sviluppate in cuccioli, è attraversate per ottene topi omozigoti.
