Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready Kit qRT-PCR in un passo Sonda
Descrizzioni
Stu pruduttu usa un sistema di buffer di lisi unicu per liberà rapidamente l'RNA da campioni di cellule cultivate per reazioni RT-qPCR, eliminendu u prucessu di purificazione di RNA laborioso è laborioso, è solu 7 minuti per ottene u mudellu di RNA necessariu, cù u 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman furnitu da u kit pò ottene risultati PCR in tempu reale è quantitativamente.
5 × Direct RT Mix è 2 × Direct qPCR Mix-Taqman anu una forte tolleranza di l'inibitore è ponu realizà una inversione efficace è amplificazione specifica utilizendu u lisatu di a mostra per esse misurata cum'è mudellu.U reagente cuntene Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer and Stabilizer, chì pò esse usatu cù buffer di lisi per detectà rapidamente è facilmente campioni, è hà e caratteristiche di alta sensibilità, specificità è stabilità.
Specificazioni
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Cumpunenti di u kit
| Rapidu FacileTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Cumpunenti di u kit Sistema di reazione qPCR da 20 μl | DRT-01021 | DRT-01022 | Nota | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Part I | tampon CL | 4 ml | 20 ml | Lisi cellulare |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| tampon ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Part II | Gomma di DNA | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2 × qPCR diretta Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20 × ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl | ||
| DdH senza RNase2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Manuale d'istruzzioni | 1 pezzu | 1 pezzu | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2×Direct qPCR Mix-Taqman pò esse acquistatu separatamente
Caratteristiche è vantaghji
■Semplice è efficace: cù a tecnulugia Cell Direct RT, i campioni di RNA ponu esse ottenuti in solu 7 minuti.
■ A dumanda di mostra hè chjuca, quant'è 10 cellule ponu esse pruvati.
■ High throughput: pò detect rapidamente RNA in cellule cultivate in 384, 96, 24, 12, 6-well plates.
■ DNA Eraser pò sguassà rapidamente i genomi liberati, riducendu assai l'impattu nantu à i risultati sperimentali successivi.
■ U sistema RT è qPCR ottimisatu rende a trascrizione inversa RT-PCR in dui passi più efficace è a PCR più specifica, è più resistente à l'inibitori di a reazione RT-qPCR.
Applicazione di kit
Campo d'applicazione: cellule in coltura.
- RNA liberatu da a lisi di campioni: applicabile solu à u mudellu RT-qPCR di stu kit.
- U kit pò esse usatu per i seguenti scopi: analisi di l'espressione genica, verificazione di l'effettu di silenziu di u genu mediatu da siRNA, screening di droga, etc.
Stoccaggio e vita di conservazione
A parte I di stu kit deve esse guardatu à 4℃;Part II deve esse guardatu à -20 ℃.
Foregene Protease Plus II deve esse conservatu à 4℃, ùn congelate micca à -20 ℃.
Reagente 2×Direct qPCR Mix-Taqman deve esse guardatu à -20℃in u bughju;s'ellu si usa spessu, pò ancu esse guardatu à 4℃ per u almacenamentu di corta durazione (utilizate in 10 ghjorni).
Principii di design di primer PCR in tempu reale
Prima prima è prima inversa
Per a PCR in Tempu Reale, u disignu di primer hè assai impurtante.I primers sò ligati à a specificità è l'efficienza di l'amplificazione PCR, è ponu esse designati cun riferimentu à i seguenti principii:
- Lunghezza di prima: 18-30bp.
- cuntenutu GC: 40-60%.
- Valore Tm: U software di cuncepimentu di Primer, cum'è Primer 5, pò dà u valore Tm di u primer.Les valeurs de Tm des amorces en amont et en aval doivent être les plus proches possibles.A formula di calculu Tm pò ancu esse usata: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Quandu si esegue a PCR, una temperatura sottu à u valore Tm di l'amorce di 5 ° C hè generalmente sceltu cum'è a temperatura di annealing (l'aumentu currispundente di a temperatura di annealing pò aumentà a specificità di a reazione PCR).
- Primers è prudutti PCR:
- A durata di u pruduttu di amplificazione di u primu di cuncepimentu PCR hè preferibile 100-150bp.
- I primi di cuncepimentu in l'area strutturale secundaria di u mudellu deve esse evitata quant'è pussibule.
- Evitate a furmazione di 2 o più basi cumplementarii trà l'estremità 3' di i primers upstream è downstream.
- Primer 3′ base terminale ùn pò esse presente cù 3 G o C consecutivi supplementari.
- I primers stessi ùn ponu micca strutture cumplementarii, altrimenti una struttura di hairpin serà furmatu, affettendu l'amplificazione di PCR.
- ATCG deve esse distribuitu u più uniformemente pussibule in a sequenza di primer, è a basa terminale 3′ deve esse evitata cum'è T.
Appendice1: Cu direttuRT-qPCR Cumpunente di u kitt pacchettu supplementu
1.Cell Lysis Solution
| Soluzione di lisi cellulare | |||
| Cumpunenti di u kit (sistema di lisi di 24 pozzi / pozzu) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| PartI | tampon CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| tampon ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PartII | Gomma di DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Cumpunenti di u kit (sistema di reazione 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× RT Mix direttu | 800 μl |
| DdH senza RNase2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Cumpunenti di u kit (sistema di reazione 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× qPCR Mix-Taqman diretta | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl |
| DdH senza RNase2O | 1,7 ml | 10 ml |
Manuali d'istruzzioni:
