Guida di analisi di prublemi

A seguente analisi di i prublemi chì pudete truvàPlant TotalRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

A colonna di spin hè intaccata

U bloccu di a colonna di spin pruvucarà u rendiment di RNA per esse ridutta o ancu incapaci di esse purificatu per ottene RNA, è a qualità di l'RNA ottenuta serà bassa.

Analisi di a causa cumuni:

1. U campionu ùn hè micca rottu cumpletamente.

A frammentazione di mostra incompleta pò bluccà a Colonna di Pulizia di DNA, chì pò ancu influenzà u rendiment è a qualità di l'RNA.Hè ricumandemu chì quandu si esegue a frammentazione di mostra, macina rapidamente in quantità sufficienti di nitrogenu liquidu per rompe i tessuti, cum'è i muri di e cellule è e membrani di i campioni quant'è pussibule.Per campioni vegetali di polisaccaridi di polifenoli, ricumandemu di utilizà Plant Total RNA Isolation Kit Plus.

2.Aspirate l'ADN-Cleaning Column isolatu supernatant, aspirate u pussibbili pellet debris cell.

A pellet di detritu di cellula aspirata pò obstruisce a Colonna solu di RNA durante i prucessi di adsorption di RNA (vede u passu 5 di a prucedura, u passu 6 di a prucedura di polisaccharide polyphenol).Hè ricumandemu chì a cura deve esse presa quandu si aspira stu supernatant per evità l'aspirazione di i detriti cellulare.

3. A quantità iniziale di mostra hè troppu grande.

L'usu eccessivu di campionu risulterà in una frammentazione incompleta di campioni o una lisi incompleta di e cellule da Buffer PRL1 o Buffer PSL1, risultatu in una colonna di purificazione intasata per operazioni di purificazione.Plant Total RNA Isolation Kit hà un massimu iniziale di 50 mg per purificazione unica di una mostra operata.Per i campioni di piante di polifenoli polisaccaridi, ricumandemu di pruvà u Plant Total RNA Isolation Kit Plus.

4. A temperatura di a centrifuga hè troppu bassu.

L'isolamentu è a purificazione di l'ARN tutale eccettu per a disrupzione di l'azotu liquidu di u tissutu di mostra, tutti i passi sò realizati à a temperatura di l'ambienti (20-25 ° C).Certi centrifughe à bassa temperatura anu temperature sottu à 20 ° C, chì ponu causà blocchi in a Colonna di pulizia DNA è / o Colonna solu RNA.In questu casu, mette a temperatura di a centrifugazione à 20-25 ° C è pre-riscalda u mischju di lisi è / o l'aggiunta di surnatante di separazione di l'etanol à 37 ° C.

Nisun RNA estratto o u rendiment di RNA hè bassu

Ci sò generalmente parechji fatturi chì affettanu l'efficienza di ricuperazione, cum'è: cuntenutu di RNA di mostra, u metudu di operazione, u voluminu di l'eluzione, etc.

Analisi di e cause cumuni cum'è quì sottu:

1.Un bagnu di ghiaccio o centrifugazione di bassa temperatura (4 ° C) hè stata realizata durante l'operazione.

Suggerimentu: Operate à a temperatura di l'ambienti (15-25 ° C) in tuttu u prucessu, ùn fate micca bagnu di ghiaccio è centrifugazione à bassa temperatura.

       2.L'RNA hè stata degradata per via di a preservazione impropria di a mostra o a preservazione à longu andà di a mostra.

Raccomandazione: I campioni appena raccolti duveranu esse congelati rapidamente in nitrogenu liquidu, è poi guardati à -80 ° C per un bellu pezzu, evitendu a congelazione ripetuta è u scongelu di i campioni;o immerge immediatamente i campioni in una soluzione stabilizzatrice di RNA RNAlater (mostri animali).

       3.A frammentazione insufficiente di a mostra è a lisi portanu à u bloccu di a colonna di purificazione.

Suggerimentu: Quandu si macina u tissutu, assicuratevi chì u tissutu hè abbastanza macinatu, è trasfiriu rapidamente à u Buffer PSL1 pre-preparatu (cunfirmà chì a proporzione curretta di β-ME hè stata aghjunta, vede u passu 1 di a prucedura).

4.L'eluente hè stata aghjuntu incorrectamente.

Suggerimentu: Assicuratevi chì RNase-Free ddH₂O hè dripped in u mità di a membrana di a colonna di purificazione.

5.U voluminu currettu di etanol assolutu ùn hè micca aghjuntu à Buffer PSL2 o Buffer PRW2.

Suggerimentu: Segui l'istruzzioni, aghjunghje u voluminu currettu di etanolu assolutu à Buffer PSL2 è Buffer PRW2 è mischjà bè prima di utilizà u kit.

6.A quantità di mostra di tissutu hè inappropriata.

Suggerimentu: Aduprate 50 mg di tissutu per 500 μl di Buffer PSL1.L'usu di troppu tissutu riducerà a quantità di RNA estratta è a purità di l'RNA resultanti serà ancu ridutta.Ricumandemu fermamente chì a dosa iniziale di mostra ùn deve micca più di 50 mg per operazione di estrazione di RNA.

7. Volum elution inappropriate o elution incomplete.

Suggerimentu: U voluminu di l'eluente di a colonna di purificazione hè 50-200 μl;se l'effettu di l'eluzione ùn hè micca satisfacente, hè cunsigliatu di allargà u tempu à a temperatura di l'ambienti dopu l'aghjunzione ddH senza RNase preriscaldata.₂O, cum'è 5-10min.

8.A colonna di purificazione hà residu di etanolu dopu à lavà cù Buffer PRW2.

   Suggerimentu: Se u tubu viotu hè centrifugatu per 1 min è ci hè sempre etanolu chì resta dopu à lavà in Buffer PRW2, pudete aumentà u tempu di centrifugazione di u tubu viotu à 2 min, o mette a colonna di purificazione à a temperatura di l'ambienti per 5 min per sguassà cumplettamente l'etanol residuale.

9.U kit hè stata utilizata incorrectly.

   Suggerimentu: Per i campioni vegetali di polisaccaridi polifenolici, cù kits cumuni cum'è Plant Total RNA Isolation Kit pò micca esse capace di ottene campioni di RNA ideali.Hè ricumandemu di utilizà Plant Total RNA IsolationKit Plus, chì hè apposta per i campioni di piante di polisaccaridi polifenolici.Un kit apposta per l'estrazione di RNA da campioni di polifenoli è polisaccaridi.

U valore OD260/OD280 hè bassu

Eluzione di RNA cù ddH₂O è utilizatu per e letture di spettrofotometri risultati in bassi valori OD260/OD280.Si consiglia di utilizzare Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 (piuttosto che ddH senza RNasi₂O per eluire l'RNA) per ottenere valori OD260/OD280 relativamente corretti, vedere "Test di concentrazione e purificazione di RNA" a pagina 19.

L'RNA purificatu hè degradatu

A qualità di l'RNA purificatu hè ligata à fatturi cum'è a preservazione di l'esemplari, a contaminazione da RNase è a manipulazione.

Analisi di e cause cumuni:

1.Tissue samples ùn sò micca stati guardati in u tempu dopu a cullizzioni.

    Raccomandazione: Se i campioni di tissuti ùn sò micca usati in u tempu dopu a cullizzioni, per piacè almacenà i campioni in nitrogenu liquidu à bassa temperatura immediatamente o trasfirili à -80 ° C per un almacenamentu longu dopu a congelazione rapida in nitrogenu liquidu, o immerge immediatamente i campioni in una soluzione stabilizzatrice di RNA RNAlater (mostri animali).Per l'estrazione di RNA, pruvate d'utilizà campioni di tissuti appena raccolti.

2.Repeated freezing and thwing of tissue samples.

   Suggerimentu: Quandu si guarda i campioni di tissuti, hè megliu tagliate in pezzi chjuchi per a preservazione, è caccià una parte di elli quandu l'utilizanu per evità a degradazione di l'RNA causata da a congelazione ripetuta è u scongelu di i campioni.

3.RNase hè introduttu in a sala di operazione o micca purtati guanti dispunibuli, maschere, etc.

   Suggerimentu: L'esperimenti di estrazione di RNA sò megliu realizati in operazioni di RNA separati, è a tavola di u laboratoriu deve esse pulita prima di l'esperimentu, è guanti dispunibuli è maschere deve esse purtatu durante l'esperimentu per evità a degradazione di RNA causata da l'intruduzione di RNase à a maiò parte.

4.U reagentu hè contaminatu da RNase durante l'usu.

   Suggerimentu: Sustituisci cù una nova serie di kit di estrazione di RNA totale di a pianta per esperimenti cunnessi.

5.I tubi di centrifugazione è i punte di pipette utilizati per a manipulazione di RNA sò contaminati da RNase.

Suggerimentu: Assicuratevi chì i tubi di centrifuga, punta di pipette, pipette, etc. utilizati in l'estrazione di RNA sò tutti RNase-Free.

Manuali d'istruzzioni:

Plant Total RNA Isolation Kit Manuale di istruzioni