Kit RT-qPCR diretto III
Descrizzione di u kit:
◮Direct RT-qPCR Kit, utilizendu Foreasy Reverse Transcriptase è Foreasy HS Taq DNA Polymerase sviluppatu da Foregene, cù un buffer di reazione unicu, rende stu kit cun forte resistenza è cumpatibilità, è pò pruvà direttamente a reazione utilizendu u sistema Foregene Lysis cum'è mudellu.Stu kit pò dumandà à u kit di rilevazione di l'acidu nucleicu COVID-19 è à u sviluppu di u kit di rilevazione di l'acidu nucleicu di altri batteri patogeni.
Descrizzione
Direct RT-qPCR Kit fornisce un tampone RT-qPCR imballato separatamente (cù Foreasy HS Taq DNA polimerasi miscelato) è alta efficienzaForeasy Reverse Transcriptase (MMLV),rendendu cunvene per a creazione di kit di back-end è l'aghjustamentu di u sistema, in una verificazione simplice.
Direct RT-qPCR Kit, utilizendu Foreasy Reverse Transcriptase è Foreasy HS Taq DNA Polymerase sviluppatu da Foregene, cù un buffer di reazione unicu, rende stu kit cun forte resistenza è cumpatibilità, è pò pruvà direttamente a reazione utilizendu u sistema Foregene Lysis cum'è mudellu.Stu kit pò dumandà à u kit di rilevazione di l'acidu nucleicu COVID-19 è à u sviluppu di u kit di rilevazione di l'acidu nucleicu di altri batteri patogeni.
Stu kit pò esse direttamente u cumpunente di u pruduttu IVD, usendu facilmente è veloce.Hè solu bisognu di verificazione faciule, senza sviluppà novu.
Specificazioni
500T, 50.000T
Cumpunenti di u kit
| U cuntenutu di u kit (sistema di reazione 20 μL) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Foreasy Rtrascrittasi inversa(200 U/μL) | 50 μl× 1 | 1 ml× 5 |
| 2 × qPCR direttaMix-Taqman | 1 ml × 5 | 500 ml× 1 |
| Istruzzioni | 1 | 1 |
Passi di u funziunamentu
A: Preparate u mudellu è u reattivu
1. Preparate mudellu RNA preparatu (Si ricumandemu à aduprà Foregene Total RNA Isolation Kit seriale kit à extracte è purificà mudellu RNA) o prodottu cracking campionu (Hè cunsigliatu à aduprà sistema Foregene Lysis), primers specifichi (10 μM) è altri cunsumables pertinente, strumentu.
2. Mettite u 2 × RT-qPCR Buffer direttu, RNase-Free ddH2O è 20 × ROX Reference Dye (se hè necessariu) in a scatula cù ghjacciu, facendu questi melt naturalmente, è mischjendu delicatamente.
B: Preparate u sistema RT-qPCR
Ottene a mità di u voluminu di buffer di reazione di u sistema di reazione (per esempiu, se u voluminu di u sistema hè 20 μL, ci vole à ottene 10 μL 2× Direct RT-qPCR Buffer). Perquantità currispondente di enzima, suggerimu chìM-MLV: sistema di reazione 10-30 U/20 μL,TaqDNA polimerasi:Sistema di reazione 1-2 U/20 μLquestu hè u nostru suggerimentu, duvete pruvà è aghjustà), aghjunghje RNA template, primers specifichi è sonde, è aghjunghje RNase-Free ddH2O à 20 μL.A preparazione specifica di u sistema di reazione RT-qPCR pò esse riferita à a seguente tabella 1.
Tabella 1: Preparazione di u sistema RT-qPCR
| Cumpunente | Volume | Concentrazione finale |
| 2 × Buffer RT-qPCR direttu | 10 μl | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase | 1-2 U | |
| Primer primariu (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Amorce inverse (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Sonda (4 μM) | 1 μl | 200 nM |
| Template (RNA o Lysate) | X μL | |
| 20 × ROX Reference Dye | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Volume tutale | 20 μl |
Nota: Forward Primer è Reverse Primer sò primers specifichi di u gene target.U sistema di qPCR puderia esse aghjustatu secondu mudelli pratichi sperimentali è PCR.Ricumandemu 400 nM per a cuncentrazione finale di a maiò parte di i primers.Aghjustate u voluminu di primers specifichi è sonde secondu a cuncentrazione preparata è a cuncentrazione finale cunsigliata, per piacè.
1*: Selezziunate a cuncentrazione finale adatta di ROX Reference Dye secondu diversi strumenti quantitativi di PCR.A cuncentrazione ottimale ROX Reference Dye di strumenti PCR quantitativi cumuni hè mostrata in a tabella seguente:
| Strumenti PCR quantitativi | Concentrazione finale di ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One,ecc. | 1× (per esempiu, aghjunghje 1μl 20×ROX Reference Dye in 20 μL sistema di reazione) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P è Mx4000, etc. | 0.5× (per esempiu, aghjunghje 0.5μl 20×ROX Reference Dye in 20 μL sistema di reazione) |
| Strumentu PCR Roche, Strumentu PCR Bio-Rad, Strumentu PCR quantitativo Eppendorf, etc. | Senza ROX Reference Dye |
Stoccaggio e vita di conservazione
U kit deve esse guardatu à -20 ± 5 ℃.Deve esse immediatamente guardatu in un frigorifero termostaticu à -20 ℃.U periodu di validità hè di 2 anni s'ellu hè almacenatu in cundizioni adattati.
