Escherichia Coli O157: Kit di rilevazione di acidi nucleici H7 (Metodo di sonda fluorescente PCR/Liofilizzazione)
Descrizzione di u kit:
Cat.No.FP103
Hè utilizatu per a rilevazione rapida è u screening di E. coli O157: H7 in l'alimentu, l'alimentu, i campioni d'acqua è i campioni ambientali.
Descrizzioni
Hè usatu perrilevazione rapida è screening di E. coli O157: H7 in l'alimentu, l'alimentazione, i campioni d'acqua è i campioni ambientali.
[Principiu di prova]
Sicondu u principiu di a tecnulugia PCR fluorescente, i primers specifichi è e sonde Taqman sò cuncepiti per u genu specificu di Escherichia coli O157: H7, è rilevati da un strumentu PCR fluorescente, in modu di realizà a rilevazione di Escherichia coli O157: H7 Rilevazione qualitativa di DNA.
Cuntenutu di u kit
Nota: a sonda di u canali ROX ùn hè micca inclusa.
| Coponenti | Specificazione | Qentità |
| tampon A | Tubu | 1 |
| tampon B | Tubu | 1 |
| U cuntrollu pusitivu | Tubu | 1 |
| U cuntrollu negativu | Tubu | 1 |
Usu previstu
Hè usatu per rilevazione rapida è screening di E. coli O157: H7 in l'alimentu, l'alimentazione, i campioni d'acqua è i campioni ambientali.
Cundizioni di almacenamiento è data di scadenza
Mantene à -20 ℃ in u bughju è evite a congelazione è u scongelu ripetutu.
U periodu di validità hè 12mesi, è a data di pruduzzione hè indicata nantu à l'imballu esternu.
Strumenti è Consumabili
Strumento PCR quantitativo fluorescente, pistole a pipette e punte corrispondenti, agitatore vortice, mini centrifuga.
Usu
1. Prucessu di mostra
1.1 Tipu di mostra: Stu kit hè adattatu per l'alimentu, l'alimentazione, i campioni d'acqua è altri campioni suspettati di esse contaminati da Escherichia coli O157: H7.Per i prudutti di carne, e bevande è altre sustanzi chì cuntenenu pigmenti, anu da esse lavati per evità di affettà a cullizzioni di signali di fluoriscenza.
1.2 Prucessu di campionu: Consultate "GB 4789.10-2016 Food Safety National Standard Food Microbiological Examination of Escherichia coli O157: H7 Test" per a preparazione di campioni, cultura di arricchimentu è isolamentu di Escherichia coli O157: H7.
- Nestrazione di l'acidu ucleicu
Pigliate 20 mL di soluzione di arricchimentu in un tubu da centrifuga da 1,5 mL, aghjunghje 200 µL di lisatu microbicu (hè necessariu un kit supplementu), vortex per 30 seconde, centrifugate brevemente è mette da parte.
Rimarche: L'estrazione di l'acidu nucleicu da u lisatu deve esse cumpletu in 10 minuti, è ùn pò micca esse guardatu per un bellu pezzu.
3. Amplificazione di l'acidu nucleicu
3.1 Accende u strumentu PCR quantitativa fluorescente per l'usu.
Tampone A è Tampone B da u kit, scioglieli accuratamente, è centrifugare brevemente.Aggiungere 18 μL di tampone A e 2 μl di tampone B a ciascun tubo di reazione PCR.Allora aghjunghje 5 mL ognunu di u cuntrollu negativu, l'acidu nucleicu estratto è u cuntrollu pusitivu in i tubi di reazione PCR, tappa i tubi, è centrifuga brevemente.
3.3 Trasferisce u tubu di reazione PCR à una macchina PCR fluorescente, è aduprate e seguenti prucedure per fà esperimenti di amplificazione: selezziunate 25 mL per u sistema di reazione, raccoglie segnali di fluorescenza à 60 ° C per ogni ciclu, è selezziunate FAM per u canali di rilevazione.
| Passu | prugramma | Numero di ciculi |
| 1 | 37 ℃ 5 min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 min | 1 |
| 3 | 95 ° C 15 s | 40 |
| 60℃ 30s (raccolta fluorescenza) |
Guide per l'analisi di prublemi
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Nisun RNA pò esse estratti o u rendiment di l'acidu nucleicu hè bassu
Ci sò generalmente parechji fatturi chì affettanu l'efficienza di ricuperazione, cum'è: cuntenutu di RNA di mostra, u metudu di operazione, u voluminu di l'eluzione, etc.。
Analisi di e cause cumuni:
1.Bagnu di ghiaccio o centrifugazione à bassa temperatura (4 ° C) durante u funziunamentu.
Suggerimentu: Funzionamentu a temperatura di l'ambienti (15-25 ° C), mai bagnu di ghiaccio è centrifuga à bassa temperatura.
2. L'almacenamiento di mostra impropriu o l'almacenamiento di mostra per troppu longu.
Suggerimentu: Mantene e mostre à -80 ° C o congelate in nitrogenu liquidu, è evite l'usu ripetutu di congelazione-discongelu;pruvate d'utilizà campioni appena raccolti per l'estrazione di RNA.
3.Lisi di mostra insufficiente
Raccomandazione: Per piacè assicuratevi chì u campione è a suluzione di travagliu (Acrilamide Linear) sò stati mischiati bè è incubati per 10 min à a temperatura di l'ambienti (15-25 ° C)
4.L'eluente hè stata aghjuntu incorrectamente
Raccomandazione: Assicuratevi chì RNase-Free ddH2O hè aghjuntu à u mità di a membrana di a colonna di purificazione.
5.Improper volume di etanol anhydrous in Buffer viRW2
Suggerimentu: Segui l'istruzzioni, aghjunghje u voluminu currettu di etanolu anidru à Buffer viRW2 è mischjà bè prima di utilizà u kit.
6.Improper usu di mostra.
Suggerimentu: 200µl di campione per 500µl di Buffer viRL.Un volume eccessivu di mostra hà da riduzzione di a rata di estrazione di RNA.
7.Improper volume elution o elution incomplete.
Suggerimentu: U voluminu di l'eluente di a colonna di purificazione hè 30-50μl;se l'effettu di l'eluzione ùn hè micca satisfacente, hè cunsigliatu di aghjunghje ddH senza RNase pre-riscaldata.2O è allargà u tempu di mette à a temperatura di l'ambienti, cum'è 5-10min
8.Colonna di purificazione hà residu di etanol dopu à rinsing in Buffer viRW2.
Suggerimentu: Se l'etanol resta sempre dopu a sciacquata in Buffer viRW2 è a centrifugazione in tubu viotu per 2 minuti, a colonna di purificazione pò esse lasciata à a temperatura di l'ambienti per 5 minuti dopu a centrifugazione in tubu viotu per sguassà completamente l'etanol restante.
A degradazione di molécule di RNA purificate
A qualità di l'RNA purificatu hè ligata à fatturi cum'è u almacenamentu di mostra, a contaminazione di RNase è u funziunamentu.
Analisi di e cause cumuni:
1.I campioni cullati ùn sò micca stati salvati in u tempu.
Suggerimentu: Se a mostra ùn hè micca utilizata in tempu dopu a cullizzioni, per piacè guardà immediatamente à -80 ℃ o nitrogenu liquidu.Per l'estrazione di molécule di RNA, pruvate d'utilizà campioni appena raccolti sempre chì pussibule.
I campioni 2.Collected eranu congelati è scongeli ripetutamente.
Suggerimentu: Evite u congelamentu è u scongelu ripetutu (micca più di una volta) durante a raccolta di campioni è u almacenamentu, altrimenti u rendiment di l'acidu nucleicu diminuirà.
3.RNase hè statu introduttu in a sala operatoria o senza guanti dispunibuli, maschere, etc.
Suggerimentu: L'estrazione di l'esperimentu di molécule di RNA hè megliu realizatu in una sala di operazione RNA separata, è a tavola sperimentale hè pulita prima di l'esperimentu.Purtate guanti è maschere dispunibuli durante l'esperimentu per evità a degradazione di l'RNA causata da l'introduzione di RNase.
4.U reagentu hè contaminatu da RNase durante l'usu.
Suggerimentu: Sustituisci cù un novu Kit di Isolazione di RNA Virale per esperimenti cunnessi.
5.The RNase contamination of the centrifuge tubes, pipette tips, etc Suggerimenti: Assicuratevi chì i tubi centrifuge, pipette tips, e pipettes sò tutti RNase-Free.
E molécule di RNA purificate anu affettatu esperimenti downstream
E molécule di RNA purificate da a colonna di purificazione affettanu l'esperimenti downstream s'ellu ci sò troppu ioni di sali o proteini, cum'è: trascrizione inversa, Northern Blot, etc.。
1.Ci sò ioni di sali restante in i molécule di RNA eluted.
Raccomandazione: assicuratevi chì u voluminu currettu di etanolu anidru hè statu aghjuntu à Buffer viRW2, è lavate a colonna di purificazione duie volte secondu a velocità di centrifugazione curretta nantu à l'istruzzioni di operazione；Se ci sò ancora ioni di sale, pudete aghjunghje Buffer viRW2 à a colonna di purificazione, è lasciate à a temperatura di l'ambienti per 5 minuti.Allora eseguite a centrifugazione per caccià a contaminazione di ioni di sali à a maiò parte
2.Ci sò l'etanol restante in e molécule di RNA eluted
Suggerimentu: una volta cunfirmatu chì e colonne di purificazione sò state lavate da Buffer viRW2, eseguite a centrifugazione in tubu viotu secondu a velocità centrifuga nantu à l'istruzzioni di operazione.S'ellu ci hè sempre l'etanol restante, pò esse lasciatu per 5 minuti à a temperatura di l'ambienti dopu una centrifugazione in tubu viotu per caccià l'etanol restante à u più grande.
Manuali d'istruzzioni:
Manuale di istruzioni per l'isolamento di RNA virale
