Cosa hè un vaccinu mRNA
U vaccinu mRNA trasferisce RNA à e cellule di u corpu per sprime è pruduce antigeni di prutezione dopu mudificazioni pertinenti in vitro, purtendu cusì u corpu à pruduce una risposta immune contr'à l'antigenu, espansione cusì a capacità immune di u corpu.[1,3].
Figura 1: Schema schematicu di l'effettu di l'iniezione diretta di a vacuna mRNA [2]
Classificazione di i vaccini mRNA
I vaccini mRNA sò divisi in dui tipi:non replicantemRNA èauto-amplificazionemRNA: l'mRNA auto-amplificatu ùn codifica micca solu l'antigenu di destinazione, ma codifica ancu a replicazione chì permette l'amplificazione di l'RNA intracellulare è u meccanismo di espressione di a proteina.I vaccini di mRNA non replicanti codificanu solu antigeni di destinazione è cuntenenu regioni 5' è 3' non tradutte (UTR).Forniscenu una stimulazione cumpleta di l'adattabilità è l'immunità innata, vale à dì l'espressione di l'antigenu in situ è a trasmissione di signali di periculu, è anu e seguenti applicazioni Caratteristiche[2,3]
●Can furnisce una stimulazione cumpleta di l'adattabilità è l'immunità innata, vale à dì l'espressione di l'antigenu in situ è a trasmissione di signali di periculu
●Puderà induce una risposta immune "equilibrata", cumpresi effetti umorali è cellulari è memoria immune
●Can combina diverse antigens senza cresce a cumplessità di a formulazione di vaccine
● A migliione cuntinuu di u putenziale immune pò esse ottenuta per via di a vaccinazione ripetuta, è ùn ci hè micca o pocu risposta immune à u traspurtadore.
I vaccini mRNA stabili di u calore ponu simplificà u trasportu è u almacenamentu di i vaccini
Figura 2: Schema schematicu di a vacuna mRNA è u so mecanismu di espressione di l'antigenu [4]
Caratteristiche di i vaccini mRNA
In cunfrontu cù i vaccini tradiziunali, i vaccini mRNA anu prucessi di produzzione simplici, velocità di sviluppu veloci, senza bisognu di cultura cellulare, è low cost.Comparatu cù i vaccini di DNA, i vaccini di mRNA ùn anu micca bisognu di entre in u nucleu è ùn ci hè micca risicu di integrazione in u genoma di l'ospiti.A mezza vita pò esse aghjustata da mudificazione.
Tabella 1: Vantaghji è disadvantages di i vaccini mRNA
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| Vantage | Mancanza |
| vaccinu mRNA | Ricerca è sviluppu rapidu, a produzzione di vaccini dura solu 40 ghjorni | Attiva una risposta immune inutile
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| inestabilità di mRNA in cundizioni fisiologiche, faciule da degradate | Ùn si integrerà micca in u genoma per evità pussibuli mutazioni terapeutiche
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| Nisun bisognu di signali di localizazione nucleari, trascrizione | L'efficacità di a sicurezza nucleare resta da esse verificata
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Figura 3: Diagramma di flussu di a pruduzzioni è a preparazione di vaccini mRNA [4]
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Strategie mejorate per a preparazione di vaccini mRNA
A causa di a bassa stabilità di l'mRNA stessu, a degradazione faciule da nucleasi in i tessuti, a bassa efficienza di entrata di e cellule, è a bassa efficienza di traduzzione, questi difetti limitanu l'applicazione di vaccini mRNA.L'efficienza di a traduzzione ghjoca ancu un rolu assai criticu.I veiculi di spedizione ponu esse divisi in vettori virali è vettori non virali (cumpresi liposomi, non-liposomi, virus, nanoparticuli, etc.).Dunque, sò necessarie misure pertinenti di migliurà.A seguita hè una strategia di migliione farmacologica per a preparazione di mRNA[2]
1 Sintetizà analoghi di cappucciu o aduprate enzimi capping per stabilizzà l'mRNA è aumentà a traduzzione di a proteina liendu à u fattore d'iniziu di a traduzzione eucariota 4E (EIF4E)
2 Aghjustate l'elementi in a regione 5'-non tradutta (UTR) è 3'-UTR per stabilizzà l'ARNm è aumentà a traduzzione di a proteina.
3 L'aggiunta di a coda Poly(A) pò stabilizzà l'ARNm è aumentà a traduzzione di a proteina
4 Nucleosidi modificati per riduce l'attivazione immune innata è aumentà a traduzzione
5 U trattamentu cù RNase III è a purificazione di cromatografia liquida di proteina rapida (FPLC) pò riduce l'attivazione immune è aumenta a traduzzione.
6 Ottimisate sequenze o codoni per aumentà a traduzzione
7 Co-consegna di fattori di iniziazione di traduzzione è altri metudi per cambià a traduzzione è l'immunogenicità
Figura 4: Trascrizione in vitro (IVT) di produzione e assemblaggio di mRNA [5]
Preparazione à grande scala di DNA plasmidicu
A purificazione di l'ADN di Plasmid elimina principalmente i contaminanti cum'è l'RNA, l'endotossina di DNA à circhiu apertu, a proteina di l'ospiti è l'acidu nucleicu di l'ospiti, è di solitu trasforma u plasmidi recombinante in E. coli.E. coli subisce una fermentazione di alta densità, dopu a separazione solidu-liquidu, è a cullizzioni di E. coli.L'E. coli hè sottumessu à a lisi alkaline, a separazione solidu-liquidu centrifuga è a clarificazione di microfiltrazione dopu a lisi, l'ultrafiltrazione è a cuncentrazione dopu a clarificazione, è dopu a purificazione cromatografica.
Purificazione di DNA plasmidicu:
Foregene General Plasmid Mini Kit
【1】苗鹤凡, 郭勇, 江新香.mRNA疫苗研究进展及挑战[J].免疫学杂志, 2016 (05): 446-449.
【2】Pardi N , Hogan MJ , Porter FW , et al.I vaccini mRNA - una nova era in vaccinologia [J].Nature Reviews Drug Discovery, 2018.
【3】Kramps T., Elbers K. (2017) Introduzione à i vaccini RNA.In: Kramps T., Elbers K. (eds) RNA Vaccines.Methods in Molecular Biology, vol 1499. Humana Press, New York, NY.
【4】Maruggi G , Zhang C , Li J , et al.mRNA cum'è una Tecnulugia Trasformativa per u Sviluppu di Vaccine per Cuntrullà e Malattie Infettive [J].Terapia Molecular, 2019.
【5】Sergio Linares-Fernández, Céline Lacroix, ,Tailoring mRNA Vaccine to Balance Innate/Adaptive Immune Response,Trends in Molecular Medicine,Volume 26, Issue 3,2020,Pages 311-323.
Tempu di Postu: Aug-05-2021
