Cunsiglii per migliurà a ricuperazione di a cola

1. Aumentà a carica di mostra durante l'elettroforesi.

2. Aduprà buffer electrophoresis appena preparatu.

3. Quandu si taglià a cola, pruvate à cutà solu a cola cù strisce per riduce u voluminu di cola di cutting: ùn hè micca bisognu di cola cù pocu frammenti di scopu, altrimenti affettarà a tarifa di ricuperazione.

4. Dopu à funnu dui o più pezzi di cola, aduprate un tubu ùn importa micca quantu u voluminu hè grande è trasfiriu à a listessa colonna.

5. A suluzione aghjuntu in u sol pò esse un pocu di più, chì hè più favurevule à u ligame di l'ADN à a membrana, ma in generale ùn supira 750ul.

6. A chjave per a ricuperazione di u gelu hè di ligà l'ADN à a colonna attraversu a cuncentrazione di u salinu, l'acidità (carga) è l'idrofobicità di a suluzione in a colonna.Dunque, se u pH di u buffer di l'elettroforesi hè troppu altu, 10ul (pH 5.0, 3mol / L NaAC) pò esse aghjuntu à u sol;in ordine per megliu intercept molécule DNA nantu à a membrana, 30% isopropanol pò esse aghjuntu à u caldu in u liquidu dopu dissolving la cola.

7. Prima di aghjunghje l'eluent, lasciate a colonna à a temperatura di l'ambienti per uni pochi di minuti (circa 10 minuti) per evaporà cumplettamente l'etanol.

8. Infine, aghjunghje menu eluent à minimize u vulume ripresa.In generale, 30-50μl eluent hè utilizatu per l'eluzione (micca troppu pocu, altrimenti ùn serà micca capaci di bagnà a membrana, chì ùn hè micca favurevule à l'eluzione);e gocce d'eluzione sò in u centru di a membrana, per elutà cumplettamente l'ADN ligatu à a membrana.

9. Dopu l'aghjunghje l'eluente, pò esse eluted in un bagnu d'acqua di 55 gradi per 5 minuti o postu in un bagnu d'acqua di 50 gradi per più di 10 minuti, o sigillatu cù un parafilm à 4 gradi per a notte, è poi centrifugate per a ricuperazione u ghjornu dopu, l'effettu hè bonu.

10.Add the centrifuged eluate back to the adsorption column and centrifuge again.

Metudi è prucedure detallati per a ricuperazione di u produttu PCR

1. Riciclamentu di gomma ordinariu

Se vulete ricuperà a cola, hè megliu aduprà un kit, chì hè cunvenutu è hà un ritmu di ricuperazione ligeramente più altu.Sè avete veramente bisognu di ricuperà manualmente, pudete aghjunghje 3 volte u voluminu di TE dopu à taglià a cola.Dopu a fusione in un bagnu d'acqua, u fenol, u fenol / cloroformu sò estratti puliti, è l'etanol hè precipitatu.Eccu.

2. Recuperazione di DNA da i geli di puntu di fusione bassu

Purificazione di Fragmenti di DNA Aggiunge TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8,0, 0,1 mmol/l EDTA) uguale à u voluminu di u gelu, è mette in un bagnu d'acqua à 65 ° C per 5 minuti per dissolve u gel completamente.

Dopu ch'ellu hè statu purtatu à a temperatura di l'ambienti, una quantità uguale di phenol (saturatu cù TE, TE hè stata sigillata in a capa superiore, è a capa inferjuri di fenol hè stata eliminata) hè stata aghjunta, è a mistura hè stata mischjata delicatamente (senza mistura necessaria), è centrifugata à 12.000 rpm per 3 minuti.Repetite 1-2 volte.

Pigliate u supernatant, aghjunghje 0,1 volumi di 3mol/L acetate di sodiu (pH 5,2) è 2,5 volte u voluminu di etanolu assolutu per fà a precipitazione di etanolu.Dissolve l'ADN purificatu cù una quantità adatta di TE, misurà u cuntenutu, è preparate per l'usu (pò esse usatu per l'analisi di a struttura di u gene di destinazione, a preparazione di sonda, etc.).

3. Recuperazione di PCR cù una bona specificità di amplificazione

Se a specificità di l'amplificazione PCR hè bona, hè solu una purificazione simplice è ricuperazione di u pruduttu PCR.Pudete aghjunghje 50ug/ml proteinase K à u pruduttu PCR, 37 gradi per 1h, extracte una volta cù fenol / chloroform, extract once with chloroform, è aghjunghje 0.1 volume di u supernatant.L'acetate di sodiu hè stata recuperata per precipitazione cù 2,5 volumi di etanolu assolutu.

I prudutti cunnessi:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/