A prova di u laboratoriu principia cù a raccolta di campioni, è a raccolta di campioni hè a più faciule da trascuratà.A cosa più impurtante per a cullizzioni di campioni hè di selezziunà u tipu di mostra currettu, aduprate strumenti di campionamentu adattati, è eseguisce trasportu è trasfurmazioni ragiunate.

I.Tipu di mostra

Tipi di mostra cumuni sò i seguenti:

U metudu di campionamentu pò riferisce à e specificazioni tecniche per u monitoraghju ambientale di u novu coronavirus in u mercatu di u cummerciu agriculu (bazaar) ":

1. Campioni di tampone da tamponi di gola, mani, vestiti è altri oggetti di i pratichi: hè necessariu di utilizà a suluzione di preservazione di virus in u tubu di campionamentu di virus è infiltrate cumplettamente i tamponi di cuttuni di campionamentu.A superficia di a terra) hè appiicata ripetutamente è lavata per più di 3 volte.À u stessu tempu, hè necessariu di realizà un sampling distribuitu multipuntu nantu à a superficia di l'ughjettu mostratu.

2. Campioni di tampone di superficia di l'alimentu: i campioni di l'alimentariu ùn ponu micca esse raccolti direttamente.L'alimentu per esse cullucatu deve esse separatu cù cura è guardatu in un saccu di campionamentu pulitu prima di cullà campioni di tampone.Hè necessariu d'utilizà a suluzione di preservazione di virus in u tubu di campionamentu di virus, dopu avè imbulighjatu cumplettamente u tampone di cotone di campionamentu, per smear ripetutamente è risciacquare a superficia di a mostra di l'alimentu per esse recullata più di 3 volte.À u listessu tempu, hè necessariu di realizà un campionamentu distribuitu multipuntu nantu à a superficia di mostra.

3. Sewage samples: Sicondu a distribuzione di u sistema di drenagiu in u mercatu, selezziunate 2-3 lochi di campionamentu di drenaje, cuncintrau nantu à a cullizzioni di a reta di pipa interna, u downstream di a direzzione di u flussu di l'acqua, o a cunnessione cù a reta di pipa municipale.Per cullà una mostra di tampone, immerse in a fossa cù un tampone di cuttuni di campionamentu per fà adsorbe l'acqua di l'acqua è sciacquate in u tubu di campionamentu più di 3 volte.Per cullà i campioni di l'acqua di l'acqua, utilizate buttigli di plastica di polietilene per cullà 30-500 mL di l'acqua di l'acqua;per a cullizzioni di l'acqua di l'acqua cù un voluminu più grande di 500 mL, i secchi di plastica di polietilene o l'equipaggiu d'arricchimentu speciale ponu esse usatu.À u listessu tempu, hè necessariu di fà un campionamentu distribuitu multipuntu per u locu di campionamentu di l'acqua.

4. Campioni d'animali: Per l'animali viventi, i tamponi di campionamentu ponu esse aduprati per cullà i tamponi di a superficia di u corpu, i tamponi orofaringeali è i tamponi anali, è i campioni di l'excrementi o di a secrezione ponu ancu esse recullati è arregistrati in cunseguenza nantu à u fogliu di registrazione.Per i campioni di l'animali chì anu sottumessu à a pelle, etc., aduprate tamponi di cuttuni per cullà a so superficia di u corpu è a cavità di u corpu.Hè necessariu d'utilizà a suluzione di preservazione di virus in u tubu di campionamentu di virus per infiltrate cumplettamente u tampone di cotone di campionamentu, è poi ripetite l'applicazione di a superficia di a mostra di l'alimentu per esse recullata.Shabu più di 3 volte.À u listessu tempu, hè necessariu di fà un campionamentu distribuitu multi-puntu nantu à a superficia di mostra.

5. Altri apparecchi : cuntenituri per u trasportu è l'allevamentu di l'animali cum'è gabbie o pisci.Prima, osservate o capiscenu i tipi specifichi di l'animali cullucati è allevati in u cuntinuu, è cullighjate campioni di swab nantu à u muru internu di u cuntinuu o mostre di liquidu di u cuntenutu.

6.Collecte campioni di aerosol in i lochi induve a ghjente si riunite, i zoni di cummerciale lucali pocu ventilati, l'uffizii è i lochi di riposu.

II.Arnesi di campionamentu
1. Tubu di raccolta di sangue
Sè avete bisognu di fà teste di l'acidu nucleicu è di l'anticoagulanti più tardi, hè cunsigliatu di utilizà un vacuum sangu chì cuntene anticoagulant EDTA per cullà u sangue;per i campioni di serum, hè cunsigliatu di utilizà un vacuum sangu senza anticoagulant.

2. Sampling swab

Hè ricumandemu d'utilizà tamponi di polipropilene invece di tamponi d'alginate di calcium o tamponi cù pali di lignu, perchè ponu cuntene sustanzi chì inactivate certi virus è impediscenu a prova di PCR.I tamponi cù capi di cuttuni ùn ponu micca esse usatu, perchè e fibri di cuttuni anu una forte adsorzione di prutezione è ùn sò micca facilmente eluted in a suluzione di preservazione sussegwente.

In a "Specificazioni Tecniche per a Raccolta Mixta 10-in-1 è a Rilevazione di Novi Acidi Nucleici Coronavirus", hè chjaramente stipulatu chì "u tampone di campionamentu deve esse fattu di poliester, nylon è altri materiali senza cuttuni è alginati di calciu, è u manicu deve esse fattu di materiale micca di legnu.U puntu di ruttura hè di circa 3 cm da a cima di a testa di tampone, chì hè faciule da rompe.

U CDC in i Stati Uniti hà ancu mintuatu "Aduprate solu tamponi di fibra sintetica cù fusti di plastica o di filu.Ùn aduprate micca tamponi d'alginate di calciu o tamponi cù fusti di lignu,postu ch'elli ponu cuntene sustanzi chì inactivate certi virus è impediscenu a prova di PCR.

Attualmente largamente utilizatu hè un tampone di nylon sterile dispunibile cumminatu cù un bastone di plastica.U swab floccante hà una megliu assorbimentu d'acqua è una rata di liberazione.Sicondu i diversi siti di campionamentu, u capu di swab hà ancu diverse dimensioni è fibre.U grossu."

3. Sample suluzione preservazione trasportu

Soluzione di preservazione di l'inattivazione di virus: una quantità adatta di cuncentrazione di sali di guanidina è una varietà di cumpunenti di lisi di virus ponu lisà direttamente u virus per liberà l'acidu nucleicu, inattivà RNase è DNase, è assicurà l'integrità di l'acidu nucleicu, chì pò esse usatu per a rilevazione qPCR successiva.Ùn pò micca esse usatu per cultivà virus è isolamentu.

Soluzione di trasportu è preservazione di virus: cuntene sali, aminoacidi, vitamini, glucose è proteini necessarii per a sopravvivenza di u virus, chì ponu mantene l'attività di u virus.Pò esse usatu per l'estrazione di l'acidu nucleicu è a deteczione di u virus in u futuru, è pò ancu esse usatu per u cultivo è a separazione di u virus.

4. Tubu di preservazione di campioni è saccu di mostra

U tubu di almacenamentu di mostra deve esse un tubu di plastica sterile cù un tappu à viti chì ùn adsorbe micca l'acidu nucleicu.Ogni tubu di mostra deve esse coperto cù un saccu di mostra per prevene a fuga è a contaminazione di a mostra.

III.Sustanze interferenti in u sample

Sustanze interferenti in esperimenti PCR

1. interferente endogene

Sustanze prisenti in a mostra di u corpu pò interferiscenu cù a deteczione di altre sustanzi.

Sangue :heme (> 1 mg / ml), hemin (> 0,1 ng / μl), trigliceridi, IgG, etc.;

Urine:urea (20 mM);

Sgabello:polisaccaridi vegetali, cholate;

Tissu:Protease, collagen;

Latte: proteasi, ioni di calcium;

Drugs: antibiotici, droghe antivirali, hormone, etc.

altru.

2. interferente esogenu

Veni da sustanzi chì ponu interferiscenu cù a deteczione di altre sustanzi in vitro.Additivi di campioni è sustanzi chì ponu esse cuntattate durante a raccolta di campioni è u processu:

Pruvisioni di prova: gel di separazione di serum, cuntainer di raccolta di campioni è tappu di gomma, catetere, fluidu di sciacquamentu di cateteru, polvere di guanti, etc.

Anticoagulant: eparina (> 0,1 U/mL), EDTA (> 0,5 mM), ecc.;

Solventi organici: isopropanol (> 0,1 IU/ml), betaine, dimethyl sulfoxide, formamide, glicerina, PEG, etc.;

Disinfettanti: alcoli (etanol> 1%), aldeidi, fenoli (fenol> 0,2%), perossidi, acidi forti (HCL), alkali forti (NaOH), etc.;

Detergente:SDS (> 0,005%);

Terra: Humus

Tintura: Indigo

altru.

In e cundizioni attuali di campionamentu esternu, cum'è a raccolta di campioni ambientali, i campioni ponu cuntene una varietà di sustanzi interferenti, è a cumpusizioni di sustanzi interferenti in ogni locu hè diversa, chì richiede esperimenti di interferenza PCR per esse realizatu secondu e cundizioni lucali.

IV.Cundizioni di almacenamentu è trasportu di mostra

I campioni clinichi appena raccolti devenu esse mandati à u laboratoriu in 2 à 4 ore dopu a cullizzioni à 2 ° C à 8 ° C.Conservate à 4 ℃ in 24 ore.I campioni utilizati per l'isolamentu di virus è a rilevazione di l'acidu nucleicu deve esse pruvati u più prestu pussibule.Specimens chì ponu esse pruvati in 24 ore pò esse guardatu à 4 ° C;I campioni chì ùn ponu esse rilevati in 24 ore deve esse guardatu à -70 ° C o sottu (se no - Conservate à 70 ° C in un frigorifero à -20 ° C).

Riassuntu:A cullizzioni standardizata, u trasportu è u almacenamentu di i campioni sò essenziali per i testi successivi.I falsi negativi di parechje teste di laboratoriu sò causati da a cullezzione, u trasportu è u almacenamentu impropriu di campioni chì portanu à a degradazione di l'acidu nucleicu virali.Tuttavia, assai laboratori ignoranu sempre l'impurtanza di u campionamentu.Spergu chì questu articulu pò sveglià l'attenzione di tutti à u campionamentu è fà un campionamentu più scientificu è raghjone !

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