Quantu sapete

À propositu di Nestrazione di l'acidu ucleicu

U principiu è a fine di l'acidu nucleicu purificatu

Tuttu hè difficiule à u principiu, l'acidu nucleicu purificatu hè u più

Iniziazione di esperimenti moleculari, per esperimenti successivi

U successu o fallimentu hà un impattu cruciale.

U spettrofotometru UV Trace / ultra-trace hè favuritu da parechji circadori scientifichi perchè pò detectà a cuncentrazione di l'acidu nucleicu è i residui di proteini è ioni di sali simpliciamente, rapidamente è economicamente.

Comu tutti sapemu, A260 significa valore OD di assorbanza di l'acidu nucleicu, A280 significa valore OD di assorbanza di concentrazione di proteine ​​​​, A230 significa valore OD di assorbanza di concentrazione di ioni di sali, cusì A260 pò cunvertisce a concentrazione di l'acidu nucleicu, A260/280 significa residuu di proteina, A260/230 significa residu di ioni di sali, ma questu hè solu una regula di ricerca basata nantu à un grande numeru di risultati ".cunvinziunali” per crede chì si pò spiegà a purità di DNA è RNA àun certu puntu.Ùn hè micca l'unicu standard per l'identificazione di u rendiment di l'acidu nucleicu è a purità, hè solu utilizatu com'è riferimentu, è ùn hè micca un "standard d'oru".

U manuale di Thermo Fisher ND-2000 enfatiza l'affidabilità di i risultati di teste

U mutivu hè chì i risultati ottenuti utilizendu un spettrofotometru UV micro/ultramicro riflette solu u rendiment è a purità di l'acidu nucleicu da u latu, è ci sò parechji fatturi chì influenzanu (via otticu, volume di mostra, cuncentrazione di mostra, valore di pH, altri ioni chì affettanu a misurazione di l'assorbanza, etc.), u valore OD misuratu ùn hè micca necessariamente precisu.À u listessu tempu, a causa di a mancanza di specificità di u materiale di determinazione di u valore di assorbanza, DNA single-stranded, DNA double-stranded, RNA, dNTPs, è alcune proteine ​​​​hannu picchi di assorbimentu à a lunghezza d'onda di 260 nm, è a cuncentrazione determinata da A260 solu ùn hè micca necessariamente l'ADN o RNA reale.A cuncentrazione, è a so integrità è a degradazione ùn pò micca esse ghjudicata.

Allora cumu ghjudicà a qualità di u nostru acidu nucleicu purificatu?In più di utilizà un spettrofotometru UV micro / ultramicro per a rilevazione, metudi cum'è l'elettroforesi di gel d'agarose sò ancu richiesti per visualizà visualmente a purità è l'integrità di l'acidu nucleicu, è per indicà a cuncentrazione in una certa misura.In questu modu, u rendiment di l'acidu nucleicu è a purità ottenuta da i risultati di rilevazione di diversi metudi sò credibili.

Comparazione di carta sperimentale

L'ADN genomicu di e cellule H1299 hè stata estratta utilizendu i kit di estrazione di DNA di a cumpagnia A, è hè stata vista una contaminazione significativa da impurità, chì hà risultatu in alti valori OD.

(Valore di misurazione OD è elettroferogramma currispundente)

Indice di valutazione

Ci hè un "standard d'oru" per u rendiment di l'acidu nucleicu è a prova di qualità?

Quantu sapemu, ùn ci hè micca un metudu simplice, veloce è economicu.Ch'ella sia spettrofotometru, elettroforesi di gel, o spettrometria di massa, tutti riflettenu a cuncentrazione è a purità di l'acidu nucleicu in a suluzione da diversi aspetti, è anu da esse ghjudicati riferenu à l'altri.

U megliu indice di valutazione hè semprel'applicazione sperimentale di seguitu.Ùn affetta micca l'efficienza di a trascrizione inversa è l'amplificazione PCR.Ottene prudutti di amplificazione affidabili è valori Ct, è ottene una sequenza cumpleta per sequenza hè una estrazione di l'acidu nucleicu successu.

Per riassume, a vista di a teoria di a ratio solu deve esse sfidata da a vista di "usà boni risultati sperimentali downstream cum'è boni paràmetri di estrazione"!

Kit di estrazione di DNA RNA Foregene consigliati per ottenere un'alta purezza DNA/RNA:

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