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Longu RNA non codificante, lncRNA hè un RNA non codificante cù una lunghezza più grande di 200 nucleotidi, generalmente trà 200-100000 nt.LncRNA regula l'espressione genica à i livelli epigenetici, di trascrizione è post-trascrizionale, è participa à u silenziu di u cromosoma X, l'imprinting di u genoma è a modificazione di a cromatina, l'attivazione di a trascrizione, l'interferenza di trascrizione, u trasportu nucleare, a regulazione di u ciculu cellulare, a regulazione di a differenziazione cellulare è l'effetti di compensazione di a dosa (effettu di compensazione di a dose) è parechje altre malatie impurtanti sò attualmente in relazione cù u prucessu di sviluppu umanu. i punti caldi in u campu di a biomedicina.

01  Tipi è caratteristiche di LncRNA

LncRNA hè divisu in parechji tipi secondu e diverse fonti di a so furmazione, cum'è mostra in a figura sopra.Hà e seguenti caratteristiche:

1. LncRNAs sò generalmente più longu, cù espressione dinamica è metudi di splicing diffirenti durante a differenziazione
2. In cunfrontu cù i geni di codificazione, lncRNA di solitu hà un livellu di espressione più bassu
3. A maiò parte di lncRNA anu una specificità di espressione temporale è spaziale evidenti in u prucessu di differenziazione è sviluppu di tissuti.
4. Ci sò espressioni caratteristiche in tumuri è altre malatie
5. I lochi subcellulari di lncRNA sò diversi
6. A sequenza hè bassa in cunsirvazioni, ma a funzione hà un certu gradu di conservazione, etc.

02 Domande Frequenti nantu à LncRNA Reverse Transcription

A causa di u bassu cuntenutu di lncRNA in e cellule, a longa durata è a struttura d'altu livellu, tali RNA sò spessu strutturi cumplessi cum'è loops stem o hairpins, è RT-qPCR hè propensu à prublemi di trascrizzione inversa senza successu o bassa efficienza.

03 Soluzione di trascrizione inversa LncRNA

In a regula cintrali, u prucessu di virus RNA chì utilizanu a so propria transcriptase inversa per sintetizà l'ADN utilizendu RNA cum'è mudellu hè chjamatu trascrizione inversa.U prucessu di utilizà a transcriptase inversa di u virus RNA per sintetizà u mudellu di cDNA in vitro hè chjamatu trascrizione inversa.L'elementi principali inclusi in u sistema di trascrizione inversa: mudellu RNA, transcriptase inversa, primers è altri cumpunenti.

1. RNA mudellu

L'influenza di u mudellu di RNA nantu à a trascrizione inversa si riflette in a so struttura, purità è integrità.A più alta a purità è l'integrità di l'RNA estratto, più alta hè l'efficienza di a trascrizione inversa è più precisi i risultati quantitativi successivi.L'RNA purificatu da i reagenti d'estrazione di RNA cumunimenti usati spessu cuntene residui di salti d'alcohol è guanidine, chì anu un forte effettu inhibitore nantu à a maiò parte di a transcriptase inversa.

2.Transcriptase inversa

A transcriptase inversa hà una influenza chjave in tuttu u sistema di trascrizione inversa.A temperatura adattata per a transcriptase inversa utilizata in a maiò parte di i laboratorii hè generalmente 42 ° C.In fattu, l'apertura di a struttura di l'ARN di altu livellu precisa una temperatura più altu, è i requisiti per a transcriptase inversa sò più altu.

3.Primer

I primers di trascrizione inversa includono primers specifici per geni, primers random e primers Oligo dT.A maiò parte di lncRNAs ùn ​​cuntenenu coda di polyA, è hè impurtante di cuncorda bè i primers aleatorii cù Oligo dT.

4.Altri cumpunenti

In vista di u fattu chì l'RNA hè particularmente faciule di degradà, l'intruduzioni di cumpunenti in u sistema di trascrizzione inversa pò esse minimizata, chì ponu efficacemente impedisce l'entrata di RNase è assicurà u prugressu lisu di a trascrizione inversa.

Foregeneottiene da RNA template, trascrizione inversa a qPCR

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U kit usa a tecnulugia di estrazione di RNA di terza generazione, senza bisognu di utilizà DNase.

11 minuti da 96, 24, 12, e cellule coltivate su piastra a 6 pozzetti, estrazione ad alta efficienza di RNA cellulare totale di alta purezza, senza gDNA, di alta qualità.

Vantaghji di a trascrizione inversa di lncRNA:

Un sistema di trascrizione inversa sviluppatu apposta per LncRNA per sguassà rapidamente a contaminazione di DNA genomicu.

U sistema di trascrizione inversa hà una alta stabilità termica è hà sempre una bona prestazione di trascrizione inversa à 50 ° C.

I mudelli cù un altu cuntenutu di GC è una struttura secundaria cumplessa ponu esse invertiti cù alta efficienza.

Vantaghjiof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase hà una efficienza di amplificazione più alta, una sensibilità di amplificazione più alta è una specificità di amplificazione più alta.

U Real PCR Easy Mix ottimisatu rende SYBR Green I avè una sensibilità di rilevazione più alta, è a so intensità di fluoriscenza hè 3-5 volte quella di i prudutti simili, chì ponu risponde à i bisogni di diversi tipi di esperimenti quantitativi di fluoriscenza.