A seguente analisi di prublemi pussibuli inbuccaletampone/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

A colonna di purificazione hè chjucata

In questu kit, in l'operazione di estrazione di DNA genomicu, a colonna di purificazione hè adsorbita direttamente nantu à a mistura di lisi enzimatica di mostra senza passu di centrifugazione, è a colonna di purificazione pò esse bluccata per via di una enzymizazione incompleta è di una viscosità alta di a mostra.

I seguenti causi pussibuli sò i seguenti:

1. Digestione enzimatica incompleta di i campioni di tissuti.

Raccomandazione: U tempu di prucessu di mostra di Foregene Protease pò esse allungatu in modu adattatu o u supernatante pò esse pigliatu dopu a centrifugazione à 12 000 rpm (~ 13 400 rpm).× g) per 5 min.

2. Usu eccessivu di campioni di tissuti o grandi tissuti.

Raccomandazione: Hè megliu micca più di 1buccale tampone in a mostra;se a mostra hè troppu grande, aumenta a dosa di Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 in cunseguenza.

3. A viscosità di mostra hè troppu altu.

Raccomandazione: I campioni ponu esse diluiti in modu adattatu cù 10 mM di Tris-HCl prima di l'estrazione di DNA genomicu.

4. Frammenti di a carta di sangue sò stati succhiati.

Raccomandazione: U tempu di centrifugazione transitoria di u passu 6 di l'estrazione genomica di spot di sangue (FTA Card) pò esse allungatu in modu adattatu.

Bassu rendiment o senza DNA

Ci hè spessu una varietà di fatturi chì affettanu u rendiment di l'ADN genomicu, cumprese l'urigine di mostra, e cundizioni di almacenamento di mostra, a preparazione di mostra, a manipulazione, etc.

L'ADN genomicu ùn pò esse acquistatu durante l'estrazione

I causi pussibuli sò i seguenti:

1. A preservazione impropria di i campioni o l'almacenamiento per troppu longu porta à a degradazione di l'ADN genomicu.

Raccomandazione: I tamponi orali sò preferibilmente campionati freschi, è ùn hè micca cunsigliatu di utilizà tamponi cunservati per l'operazione di estrazione di DNA genomicu;i campioni di spot di sangue duveranu assicurà chì a qualità hè qualificata è u tempu di almacenamiento ùn deve esse troppu longu.

2. L'usu di tissutu troppu pocu pò esse risultatu in nisuna estrazione di l'ADN genomicu currispundente.

Raccomandazione: Segui ubuccal Istruzzioni di campionamentu di tampone in a guida di u funziunamentu, è sguassate quante volte pussibule per chì abbastanza cellule ponu esse attaccate à u tampone orale per l'estrazione di DNA genomicu;per l'estrazione di campioni di macchie di sangue, l'area di taglio di macchie di sangue pò esse aumentata in modu adattatu.

3. Foregene Protease hè impropriamente cunservatu, risultatu in una diminuzione di a so attività o inattivazione.

Raccomandazione: Cunfirmà e cundizioni di almacenamento diu Foregene Protease o rimpiazzà cù una nova Foregene Protease per a reazione enzimatica.

4. A preservazione impropria di u kit o u tempu di almacenamento hè troppu longu, risultatu in u fallimentu di certi cumpunenti in u kit.

Raccomandazione: Cumprate un novubuccale tampone DNAisulamentu kit per i prucessi cunnessi.

5. Buffer WB ùn aghjunghje micca etanolu assolutu.

Raccomandazione: Confirmate chì u buffer WB aghjunghje u voluminu currettu di etanolu assolutu.

6. L'eluente ùn hè micca aghjuntu currettamente à a film di silicone.

Raccomandazione: aghjunghje 65°CL'eluente pre-riscaldatu scende à u mità di a membrana di silicone è lasciate à a temperatura di l'ambienti per 5 min per aumentà l'efficienza di l'eluzione.

LDNA genomicu à u bonu rendimentu isolatu

I seguenti causi pussibuli sò i seguenti:

1. A preservazione impropria di i campioni o l'almacenamiento per troppu longu porta à a degradazione di l'ADN genomicu.

Raccomandazione: I tamponi orali sò preferibilmente campionati freschi, è i tamponi cunservati ùn deve micca esse usatu per l'estrazione di DNA genomicu.

2. Se a quantità di mostra di tissutu hè troppu chjuca, u cuntenutu di DNA genomicu extracted serà menu.

Raccomandazione: Segui l'istruzzioni di campionamentu di tampone orale in a guida di u funziunamentu, sguassate quante volte pussibule per chì abbastanza cellule ponu esse attaccate à u tampone orale per l'estrazione di DNA genomicu.

3. Foregene Protease hè impropriamente cunservatu, risultatu in una diminuzione di a so attività o inattivazione.

Raccomandazione: Cunfirmà e cundizioni di almacenamento dithe Foregene Protease o rimpiazzà cù una nova Foregene Protease per a reazione enzimatica.

4. Problemi eluenti.

Raccomandazione: Aduprate Buffer EB per l'eluzione;si usa ddH₂O o altri eluenti, cunfirmà chì u pH di l'eluate hè trà 7,0-8,5.

5. L'eluate ùn hè micca aghjuntu currettamente dropwise.

Raccomandazione: Aghjunghjite gocce d'eluente à u mità di a membrana di silicone è lasciate à a temperatura di l'ambienti per 5 min per aumentà l'efficienza di l'eluzione.

6. U liquidu di l'eluzione s'accumula troppu pocu.

Raccomandazione: Aduprate l'eluente per l'eluzione di DNA genomicu cum'è necessariu in l'istruzzioni, almenumicca menu chè 15μl.

La purezza of DNA genomicuisolatu

A bassa purità di DNA genomicu pò purtà à fallimentu o risultati insatisfactori di esperimenti downstream, cum'è: l'enzimi ùn ponu micca esse tagliati, a PCR ùn pò micca ottene u fragmentu di genu d'interessu, etc.

I causi pussibuli sò i seguenti:

1. A contaminazione di l'eteroproteini, a contaminazione di RNA.

Analisi: A colonna di purificazione ùn hè micca lavata cù Buffer PW;a colonna di purificazione di lavaggio Buffer PW ùn hè stata lavata cù a velocità centrifuga curretta.

Raccomandazione: Assicuratevi chì ùn ci hè micca precipitazione in u supernatant prima di aghjunghje l'etanol;assicuratevi di lavà a colonna di purificazione secondu l'istruzzioni, è questu passu ùn pò esse omessi.

2. Contaminazione di ioni impurità.

Analisi: A colonna di purificazione di u lavatu di Buffer WB hè stata omessa o lavata una sola volta, risultatu in una contaminazione ionica residuale.

Raccomandazione: Assicuratevi di lavà Buffer WB 2 volte cum'è diretta per caccià ioni residuali quantu pussibule.

3. Cuntaminazione di l'enzima RNA.

Analisi: RNases stranieri sò stati aghjuntu à u buffer;L'operazione di lavatura di u buffer PW era sbagliata, risultatu in residui di RNasi, affettendu l'operazioni sperimentali di RNA in a valle, cum'è a trascrizione in vitro.

Raccomandazione: Foregene series acid nucleicisolaI kits di zione ponu eliminà l'RNA senza l'aggiunta addiziale di RNase,cusì Kit d'isolazione di DNA per tampone buccale/FTA Cardbisognu't aghjunghje RNase;assicuratevi di seguità l'istruzzioni per a colonna di purificazione di lavaggio Buffer PW, è questu passu ùn pò esse omessi.

4. Residu di etanolu.

Analisi: Buffer WB ùn hà micca realizatu centrifugazione di tubu vacu dopu à lavà a colonna di purificazione.

Raccomandazione: Eseguite l'operazione curretta di centrifugazione di tubi vioti secondu l'istruzzioni.

5. Altra contaminazione impurità.

Analisi: I campioni salvati o mostri speciali ùn sò micca pretrattati.

Raccomandazione: Pretratte bè a mostra cum'è struitu.