Credu chì tutti anu sempre scontru tali o tali prublemi quandu facenu reazzione PCR, ma a maiò parte di elli ponu esse classificate in dui prublemi principali:

Amplificazione troppu pocu di u mudellu di gene (amplificazione);
Troppa amplificazione di geni non target.
L'usu di additivi hè una di e strategie cumuni per risolve questi prublemi.Di solitu u rolu di l'additivi hà dui aspetti:
struttura secundariadi genes (struttura secundaria);
Reduce l'imprimazione non specifica.
Oghje, l'editore vi presentà brevemente l'additivi cumuni in reazzione PCR è e so funzioni.
Additivi chì riduce a struttura secundaria
sulfossidu(DMSO)
campioni di genicun altu cuntenutu di GC.Tuttavia, DMSO riduce ancu assai l'attività di polimerasi Taq.Dunque, ognunu hà da equilibrà l'accessibilità di u mudellu è l'attività di a polimerasi.L'editore suggerisce chì pudete pruvà diverse concentrazioni di DSMO, cum'è da 2% à 10%, per truvà a cuncentrazione chì cunvene u vostru esperimentu.
Detersivi non ionici
I detergenti non ionici, cum'è 0,1-1% Triton X-100, Tween 20 o NP-40, di solitu riduce a struttura secundaria di DNA.Ancu s'ellu pò aumentà l'amplificazione di u genu mudellu, ancu causarà u prublema di l'amplificazione non specifica.Allora, sti additivi funzionanu bè per reazzione di PCR di bassa rendimentu senza detriti, ma micca cusì bè per reazzioni PRC relativamente impure.Un altru benefiziu di i detergenti non ionici hè a riduzzione di a contaminazione SDS.Di solitu durante u prucessu di estrazione di DNA, SDS serà purtatu à u passu PCR, chì impedisce assai l'attività di a polimerasi.Dunque, aghjunghje 0.5% Tween-20 o Tween-40 à a reazione pò neutralizà l'effetti negativi di SDS.
Betaine_
Betaine pò migliurà l'amplificazione di l'ADN riducendu a furmazione di a struttura secundaria è hè generalmente un "misteru" aghjuntu à i kit di PCR cummerciale.Se vulete usà betaine, duvete mette betaine o betaine mono-hydrate (Betaine o Betaine mono-hydrate), ma micca betaine hydrochloride (Betaine HCl), aghjustate à una concentrazione finale di 1-1.7M.A betaine pò ancu aiutà à migliurà a specificità perchè elimina a dependenza di a cumpusizioni di a coppia di basa di a fusione di DNA / denaturazione di DNA.
Additivi per riduce l'imprimazione non specifica
Formamide
Formamide hè un additivu PCR organicu cumunimenti utilizatu.Pò esse cumminati cù u groove maiò è minore in l'ADN, riducendu cusì a stabilità di a doppia hélice di l'ADN maestru è abbassendu a temperatura di fusione di l'ADN.A cuncentrazione di formamide utilizata in esperimenti PCR hè di solitu 1% -5%.
Tetramethylclorure d'ammoniu( TMAC)
Tetramethylammonium chloride pò aumentà a specificità di l'hibridazione (specificità di l'ibridazione) è aumentà a temperatura di fusione di l'ADN.Cusì, TMAC pò eliminà a primazione non specifica è riduce u misbinding di DNA è RNA.Sè vo aduprateprimers degeneratiin a reazzione PCR, ricordate di aghjunghje TMAC, chì hè comunmente utilizatu à una cuncentrazione di 15-100mM.
Altri additivi cumuni
In più di e duie categurie di additivi mintuatu sopra, ci sò assai additivi cumuni in reazzione PCR, ancu s'ellu anu diverse funzioni, sò ancu assai impurtanti.
Ioni di magnesiu
L'ione di magnesiu hè un cofactor indispensabile (cofactor) di a polimerasi, vale à dì, senza ioni di magnesiu, a polimerasi hè inattiva.Tuttavia, troppu ioni di magnesiu pò ancu influenzà l'efficienza di a polimerasi.A cuncentrazione di ioni di magnesiu in ogni reazione PCR varierà.L'agenti chelanti (cum'è EDTA o citrate), a cuncentrazione di dNTPs è e proteine ​​​​affettanu a cuncentrazione di ioni di magnesiu.Allora, sè vo avete prublemi cù u vostru esperimentu PCR, pudete pruvà à cambià diverse concentrazioni di ioni di magnesiu, per esempiu, da 1.0 à 4.0mM, cù un intervallu di 0.5-1mM in trà.
Hè da nutà chì parechji cicli di congelazione-discongelu ponu purtà à a stratificazione di cuncentrazione di a suluzione di cloruru di magnesiu.Per quessa, vi tocca à dissolve cumpletamenti prima di ogni usu, è mischjà bè prima di aduprà.
Serum albumina bovina(albumina bovina, BSA)
In l'esperimenti di chimica moleculare, l'albumina di serum bovina hè un additivu assai cumuni, in particulare in a digestione di l'enzimi di restrizzioni è l'esperimenti di PCR.In e reazioni di PCR, BSA hè utile à riduce i contaminanti cum'è i composti fenolici.È hè ancu dettu chì pò riduce l'aderenza di i reactanti à u muru di u provettu.In a reazione PCR, di solitu a cuncentrazione di BSA aghjuntu pò ghjunghje à 0,8 mg / ml.
 
Prodotti Relativi:
Eroe PCR(cù tintura)
Eroe PCR