Avete sempre aduprà Trizol per estrae l'RNA?
Oiu, ùn lasciate micca preoccupari di a vostra salute !
Trizol hè per esse marginalizatu, ùn mi dite micca chì site sempre in u bughju ?

U cumpunente principale di u reagentu Trizol hè u fenol, è i reagenti organici cum'è u cloroformu sò ancu aghjuntu in l'operazione sperimentale.L'esposizione à longu andà causarà danni à a vostra salute, soprattuttu u cuntattu direttu di a pelle pò causà severi bruciature chimiche è cicatrici permanenti.

In circustanze nurmale, i partenarii di u laboratoriu ponu riduce i periculi solu armandusi cumplettamente (purtandu camice di laboratoriu, guanti è maschere).

È u mo cunsigliu per voi hè: per piacè rimpiazzà Trizol direttamente per evità danni da a fonte.

1. U pruduttu di prima generazione di estrazione di RNA
Esce in u 1987 (reagenti Trizol)

vantaghju:
Estrazione più cumpleta

Svantaghji:
Reagenti tossichi cum'è guanidine isothiocyanate-phenol-chloroform sò necessarii;
funziunamentu ingombrante;
Hè bisognu di utilizà DNase per sguassà a contaminazione di DNA

2.U pruduttu di a seconda generazione di l'estrazione di RNA
Esce in 1994 (QIAGEN RNeasy è a maiò parte di i prudutti domestici)

vantaghju:
U metudu centrifuga di colonna hè aduttatu, chì hè faciule d'opere;

Svantaghju:
Hè bisognu di centrifugà per sguassà i detriti di tissuti
Hè bisognu di utilizà DNase per sguassà a contaminazione di DNA

3.U pruduttu di a terza generazione di l'estrazione di RNA
Esce in u 2005 (QIAGEN RNeasy Plus è Foregenei prudutti di a serie di purificazione di RNA)

vantaghju:
Aduprate direttamente a colonna di eliminazione di DNA per caccià l'ADN è i detriti di tissuti à u stessu tempu, risparmiendu tempu è sforzu;
Sicuru è cunvene, ùn hè micca bisognu di aghjunghje una colonna di filtru è DNase per sguassà facilmente impurità è evità a contaminazione di DNA

Fighjemu e differenze operative trà u pruduttu di prima generazione (Trizol), u pruduttu di a seconda generazione (RNeasy) è u pruduttu di a terza generazione (Foregene) di l'estrazione di RNA:

L'operazione in a figura hè chjara: u pruduttu di a terza generazione hà vantaghji evidenti

Solu trè parolle per discrive: faciule!Rapidu!Sicurezza

U graficu PK di i risultati sperimentaliperi prudutti di prima generazione, seconda generazione è terza generazione di estrazione di RNA:

1. Eelettroforetogramma

A prima generazione (1: Trizol)
A seconda generazione (2:QIAGEN Rneasy)
A terza generazione (3: QIAGEN RNeasy plus, 4: Foregene)

Qualessu tipu di pruduttu hè bonu, sapete per paragone
RNA estratti cù u kit Foregene
Micca solu una alta cuncentrazione, ma ancu una bona integrità

2. Graficu qPCR (graficu di a curva di amplificazione)

A prima generazione (Trizol)

A seconda generazione (blu celusignificaQIAGEN RNeasy-, rossusignificaQIAGEN RNeasy +)

A terza generazione (blu significa Foregene, verde significa QIAGEN RNeasy plus)

(Nota: U graficu QIAGEN RNeasy di qPCR di seconda generazione significa chì u kit ùn aghjunghje micca DNase è ùn elimina micca a contaminazione di l'ADN. Per quessa, u CT hè più altu è u risultatu ùn hè micca precisu; QIAGEN RNeasy + significa chì a DNase hè stata aghjunta è a contaminazione di l'ADN hè stata eliminata, è u risultatu hè precisu)

Ch'ella sia un elettroforetogramma o un graficu di curva di amplificazione PCR quantitativa, a qualità di i prudutti Foregene ùn hè micca inferjuri à i prudutti impurtati stranieri.