Autori: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Unità: Hospital Jiaozhou, Hospital Dongfang Affiliatu à l'Università Tongji

Attualmente, u tipu di mostra principale per a rilevazione di l'acidu nucleicu di patogeni respiratorii hè u tampone di gola.Ci sò parechji tippi di suluzioni di cunservazione di campioni cumunimenti utilizati, tutti chì anu bisognu à esse refrigerati o congelati per u trasportu è u almacenamentu;Hè difficiuli di cuntrullà tuttu u prucessu di bassa temperatura durante u prucessu di cullizzioni è di trasportu, è hè difficiule di assicurà u cuntrollu di qualità prima di a prova di mostra.^[1-2].

L'RNasi (RNase) hè un'endonucleasi chì idrolizza l'RNA, principarmenti interrompendu i legami fosfodiesteri trà i nucleotidi.A molècula RNase hè assai stabile, ci sò ligami disulfide in a struttura, è a so attività ùn hà micca bisognu di a prisenza di cationi divalenti, cusì RNase ùn hè micca facilmente denaturatu, è hè faciule di rinatura ancu dopu à alta temperatura o l'usu di denaturanti.RNases sò divisi in endogeni è esogeni.I RNases endogeni ponu esse liberati à u stessu tempu quandu e cellule sò ruptured.Dunque, eliminà u rolu di RNasi endogeni hè un passu assai criticu in u prucessu di estrazione di RNA.I RNasi esogeni sò largamente distribuiti.RNases esistenu in l'aria, a pelle umana, i capelli è a saliva, chì sò mutivi impurtanti per a degradazione faciule di RNA.^[3].

Interrogazione di dati

CANS-CL02-A009 "Application of Medical Laboratory Quality and Competence Accreditation Guidelines in the Field of Molecular Diagnosis" in i requisiti tecnichi prupone chì i standard di qualità di l'acqua adattati devenu esse formulati secondu l'applicazione;Contenitori ermetici a gettare:

RNase/Classificazione

(1) RNase A

A ribonucleasi A (RNase A), derivata da u pancreas bovinu, hè una endoribonuclease chì pò attaccà specificamente l'estremità 3' di i residui di pirimidina nantu à l'RNA, tagliando a citosina o l'uracile formate da nucleotidi adiacenti.U ligame fosfodiesteru, u pruduttu finali di a reazione hè un nucleotide 3′ pirimidina è un oligonucleotide cù un nucleotide 3′ pirimidina à a fine.

(2) RNase T1

A ribonucleasi T1 (RNase T1) hè derivata da Aspergillus orjzae, agisce specificamente nantu à u fosfatu 3′-terminale di guanina, è u situ di scissione hè trà u fosfatu 3′ di guanina è u 5′ hydroxyl di nucleotidi adiacenti.U pruduttu finali di a reazione hè l'acidu 3'guanylic è i frammenti di oligonucleotide cù l'acidu 3'guanylic à a fine.

(3) RNase H

A ribonucleasi H (RNase H) hè stata scuperta per a prima volta da u tissutu di timu di vitello, è u so gene codificante hè statu clonatu in Escherichia coli.Puderà specificamente degradare l'ADN: i filamenti di RNA in i duplexi hibridi di RNA, risultatu in oligonucleotidi è mononucleotidi cù estremità 3'-OH è 5'-monofosfatu, ùn pò micca degradate DNA o RNA monofila o doppia.

RNase

Funzione è usu

Ribonuclease pò catalizà a degradazione di l'acidu ribonucleicu (RNA) è pò esse sintetizatu artificialmente.L'unguentu medicinali hè aduprata per trattà u traumu è u dolore articular.Sicondu i rapporti, a ribonucleasi pò cambià u metabolismu di e cellule d'ospiti, inibisce a sintesi di virus, inibisce a proliferazione di virus di l'influenza in vitro, è impedisce a furmazione di vaccinia è virus herpes in embrioni di pollo.L'usu clinicu di ribonuclease iniezione intramusculare ogni ghjornu di 180 mg, benefica per u trattamentu di l'encefalite epidemica, a ribonuclease pò catalizà a degradazione di l'acidu ribonucleicu (RNA), è pò esse sintetizatu artificialmente.L'unguentu medicinali hè aduprata per trattà u traumu è u dolore articular.Sicondu i rapporti, a ribonucleasi pò cambià u metabolismu di e cellule d'ospiti, inibisce a sintesi di virus, inibisce a proliferazione di virus di l'influenza in vitro, è impedisce a furmazione di vaccinia è virus herpes in embrioni di pollo.L'usu clinicu di ribonuclease iniezione intramusculare ogni ghjornu di 180 mg hè benefica per u trattamentu di l'encefalite epidemica.

RNase

Definizione di l'inhibitore

Definizione di unità inibitore di RNase: A quantità di enzima necessaria per inibisce u 50% di l'attività di 5ng RNase A hè una unità.

Cume l'Inhibitori di RNase Funcione

Isotiocianate di guanidina:

Guanidine isothiocyanate hè un compostu urgànicu cù a formula molekulari C2H6N4S.Principalmente utilizatu in a medicina biologica, i reagenti chimichi, etc. Guanidine isothiocyanate hè un agentu di lisi di prutezione, è hè spessu usatu cum'è u principale cumpunente di a suluzione di lisi in i reagenti di diagnostichi moleculari.Puderà lisà i tessuti, distrughje a struttura cellulare è dissociate l'acidu nucleicu da a nucleoproteina, è hà una forte denaturazione à RNase.Hè l'inhibitore di RNase più efficau attualmente.

TRIzol hè un novu reattivu di estrazione di RNA tutale chì pò direttamente estrae l'RNA tutale da e cellule o tessuti.Contene sustanzi cum'è fenol è guanidine isothiocyanate, chì ponu disturbà rapidamente e cellule è inibisce e nucleases liberate da e cellule.

(Tuttavia, l'isotiocianatu di guanidine hè periculosu per a salute di i ricercatori di u laboratoriu).

RNAsin:

Glicoproteina acida estratta da fegato di ratto o blastoderma umana.Rnasin hè un inibitore micca cumpetitivu di RNase, chì pò unisce à diverse RNases per inattivà.

(Più dettagli: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Htemperatura alta:

A temperatura alta hè ancu un modu cumuni di denaturazione di a proteina.

Diethylpyrocarbonate (DEPC):

DEPC hè un inhibitore di RNase forte, ma incompletu, chì pò inibisce l'attività di RNase cumminendu cù l'anellu imidazole di l'aminoacidu di u gruppu attivu RNase per denature e proteine.

Vanadyl ribonucleoside cumplessu:

Un cumplessu furmatu da ioni di l'ossidu di vanadiu è nucleosidi, chì si unisce à RNase in forma di sustanzi di transizione, chì ponu quasi completamente inibisce l'attività di RNase.

altru:

SDS, urea, terra di diatomee, etc. anu ancu un certu effettu inhibitore nantu à RNase.

Recensioni di l'esperti

Li Yujie Chief Technician

Direttore di Dipartimentu di Laboratoriu, Hospital Jiaozhou, Hospital Dongfang Affiliatu à l'Università Tongji

Per impediscenu a biodegradazione di RNase esogenu, maschere, guanti è cappelli deve esse purtati è rimpiazzati spessu durante u prucessu di estrazione di RNA.Tutti i vetri deve esse cotti in un fornu di secca à 200 ° C per più di 2 ore.I materiali utilizati per a panificazione, cum'è u plasticu, deve esse trattatu cù l'acqua DEPC, è poi lavatu cù acqua distillata.I reagenti o dispusitivi utilizati per l'estrazione, a preservazione è l'identificazione di l'RNA deve esse dedicatu à l'RNA, è deve esse stallatu un spaziu di operazione RNA indipendente.

riferimenti:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Batteri è virus in a nasofaringe immediatamente prima di l'iniziu di l'infezzione respiratoria aguda in i zitelli indigeni australiani [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Branch Control Infection Hospital di l'Associazione Cinese di Medicina Preventiva.Linee guida per a cullizzioni è l'ispezione di campioni microbichi clinichi [J].Chinese Journal of Hospital Infection, 2018 (20): 3192-3200.

[3] "Test Clinique Ten Thousand Why Volume Test di Biologia Moleculare"