Guida di analisi di prublemi

U seguitu hè un analisi di i prublemi chì ponu esse scontri in l'estrazione di l'ADN / RNA virali, sperendu esse utile à i vostri esperimenti.Inoltre, per altri prublemi sperimentali o tecnichi, oltre à l'istruzzioni di u funziunamentu è l'analisi di prublemi, avemu un supportu tecnicu dedicatu per aiutà.Sè avete bisognu, per piacè cuntattateci: 028-83360257 o E-mail:

Tech@foregene.com.

Nisuna estrazione di l'acidu nucleicu o un rendimentu bassu di l'acidu nucleicu

Ci sò generalmente parechji fatturi chì affettanu l'efficienza di ricuperazione, cum'è: cuntenutu di l'acidu nucleicu di mostra, u metudu di operazione, u voluminu di eluzione, etc.

Analisi di e cause cumuni:

1. Un bagnu di ghiaccio o una centrifugazione di bassa temperatura (4 ° C) hè stata realizata durante a prucedura.

Suggerimentu: Operate à a temperatura di l'ambienti (15-25 ° C) in tuttu u prucessu, ùn fate micca bagnu di ghiaccio è centrifugazione à bassa temperatura.

2. A mostra hè stata guardata improperly o a mostra hè stata guardata per troppu longu.

Raccomandazione: Conservate i campioni à -80 ° C è evite a congelazione è u scongelu ripetutu;pruvate d'utilizà campioni appena raccolti per l'estrazione di l'acidu nucleicu.

3. Lisi di mostra insufficiente.

Raccomandazione: Per piacè assicuratevi chì u campione è a suluzione di travagliu di lisi sò mischiati bè è incubati à a temperatura di l'ambienti (15-25 ° C) per 10 minuti.

4. Addizione incorrecta di eluenti.

Suggerimentu: Assicuratevi chì RNase-Free ddH2O hè aghjuntu goccia à u mezu di a membrana di a colonna di purificazione, è ùn lasciate micca nantu à l'anellu di a colonna di purificazione.

5. U voluminu currettu di etanol assolutu ùn hè micca aghjuntu à u Buffer RW2.

Suggerimentu: Segui l'istruzzioni, aghjunghje u voluminu currettu di etanolu assolutu à Buffer RW2 è mischjà bè prima di utilizà u kit.

6. Volume di mostra inappropriatu.

Suggerimentu: 200 µl di campione sò processati per ogni 500 µl di Buffer DRL.L'eccessiva elaborazione di campioni risulterà in un rendimentu di estrazione di l'acidu nucleicu più bassu.

7. Volum elution inappropriate o elution incomplete.

Raccomandazione: U voluminu di l'eluente di a colonna di purificazione hè 30-50μl;se l'effettu di l'eluzione ùn hè micca satisfacente, hè cunsigliatu per allargà u tempu à a temperatura di l'ambienti dopu l'aghjunghje ddH2O RNase-Free preheated, cum'è 5-10min.

8. L'etanol resta nantu à a colonna dopu à lavà cù Buffer RW2.

Suggerimentu: Se l'etanol resta dopu a centrifugazione cù Buffer RW2 per 2 minuti, a colonna pò esse piazzata à a temperatura di l'ambienti per 5 minuti dopu a centrifugazione per sguassà completamente l'etanol residuale.

L'acidu nucleicu purificatu hè degradatu

A qualità di l'acidu nucleicu purificatu hè ligata à a preservazione di a mostra, a contaminazione da RNase, u funziunamentu è altri fattori.Analisi di e cause cumuni:

1. I campioni cullati ùn sò micca stati guardati in u tempu.

Suggerimentu: Se a mostra ùn hè micca utilizata in tempu dopu a cullizzioni, per piacè guardà immediatamente à -80 ° C à bassa temperatura.Per l'estrazione di RNA, pruvate d'utilizà campioni appena raccolti.

2. Raccoglie campioni è congelate è scongelu ripetutamente.

Suggerimentu: Evite a congelazione è u scongelu (micca più di una volta) durante a cullizzioni è l'almacenamiento di campioni, altrimenti u rendiment di l'acidu nucleicu serà ridutta.

3. RNase hè introduttu in a sala di operazione o guanti dispunibuli, maschere, etc. ùn sò micca purtati.

Raccomandazione: l'esperimenti di estrazione di RNA sò megliu realizati in una sala di operazione RNA separata, è a tavola di u laboratoriu deve esse pulita prima di l'esperimentu.

Purtate guanti è maschere dispunibuli durante l'esperimentu per evità a degradazione di l'RNA causata da l'intruduzione di RNase à a maiò parte.

4. U reattivu hè stata contaminata cù RNase durante l'usu.

Raccomandazione: Sustituisci cù un novu Kit d'isolazione di DNA / RNA virali per esperimenti cunnessi.

5. I tubi di centrifuga è i punte di pipette utilizati per a manipulazione di RNA sò contaminati da RNase.

Suggerimentu: Assicuratevi chì i tubi di centrifuga, punta di pipette, pipette, etc. utilizati per l'estrazione di RNA sò tutti RNase-Free.

L'acidu nucleicu purificatu influenza l'esperimenti downstream

L'ADN è l'RNA purificati da a colonna di purificazione, se u cuntenutu di ioni di sali è di prutezione sò troppu altu, affettarà l'esperimenti downstream, cum'è: amplificazione PCR, trascrizzione inversa, etc.

1. L'ADN eluted è l'RNA anu ioni residuali di sali.

Suggerimentu: Assicuratevi chì u voluminu currettu di etanol assolutu hè aghjuntu à u Buffer RW2, è lavate a colonna di purificazione duie volte à a velocità di centrifugazione specificata in l'istruzzioni di operazione;Eseguite a centrifugazione per minimizzà a contaminazione di ioni sali.

2. U DNA eluted è RNA anu residu di etanolu.

Suggerimentu: Dopu avè cunfirmatu u lavatu cù Buffer RW2, eseguite a centrifugazione di u tubu viotu à a velocità di centrifugazione in e istruzioni operative;s'ellu ci hè sempre residu di etanol, pudete centrifugà u tubu viotu è poi mette à a temperatura di l'ambienti per 5 minuti per caccià u residu di etanol à u più grande.

Manuali d'istruzzioni:

Manuale di istruzioni per l'isolamento di DNA e RNA virale