Guida di analisi di prublemi

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Bassu rendiment o senza DNA

Ci sò generalmente parechji fatturi chì affettanu u rendiment di l'ADN genomicu, cumpresa a fonte di a mostra, l'età di a mostra, e cundizioni di almacenamiento di a mostra, è l'operazione.

L'ADN genomicu ùn pò esse acquistatu durante l'estrazione

1. I campioni di tissuti sò improperly stored or stored for too long, resulting in a degradazione di l'ADN genomicu.

Raccomandazione: Store samples tissue in nitrogenu liquidu o -20°C;pruvate d'utilizà campioni recentemente raccolti per l'estrazione di DNA genomicu.

2. Troppu pocu quantità di mostra pò causà chì l'ADN genomicu currispundente ùn sia micca estratto.

Suggerimentu: Per i campioni di tissuti chì sò stati almacenati per un bellu pezzu o chì anu una degradazione severa di l'ADN genomicu, a quantità di campioni di tissuti pò esse aumentata in modu adattatu per estrae DNA genomicu considerable.A quantità di a mostra pò esse determinata secondu i bisogni di l'ADN, ma a mostra fresca ùn deve micca più di 100mg, è a mostra secca ùn deve micca più di 30mg.

3. U campionu ùn hè micca struitu cù nitrogenu liquidu o postu per troppu longu dopu u nitrogenu liquidu.

Suggerimentu: Durante l'estrazione di l'ADN, l'esemplariu deve esse cumpletu cù nitrogenu liquidu per rompe u muru cellulare;dopu a macinazione, per piacè trasferisce a polvere di mostra à PL1 preriscaldata à 65°C u più prestu pussibule (una volta chì a polvera di terra hè fusa, l'ADN genomicu cumincià à degradà rapidamente).

4. L'almacenamiento impropriu di Foregene Protease risultati in attività ridutta o inattivata.

Raccomandazione: Cunfirmà e cundizioni di almacenamento di Foregene Protease o rimpiazzà cù una nova Foregene Protease per l'idrolisi enzimatica.

5. U kit hè impropriamente guardatu o guardatu per troppu longu, facendu chì certi cumpunenti in u kit fallenu.

Raccomandazione: Cumprate un novu kit di estrazione di DNA genomicu di a pianta per l'operazioni cunnesse.

6. Usu impropriu di u kit.

Suggerimentu: Acquistu un Kit d'isolazione di DNA di a pianta dedicatu à i campioni per l'estrazione è a purificazione di l'ADN genomicu di a pianta.

7. Buffer WB senza aghjunghje anidru etanolu.

Raccomandazione: Assicuratevi di aghjunghje u voluminu currettu di etanolu assolutu à Buffer WB.

8. L'eluente ùn hè micca goccia nantu à a membrana di silice currettamente.

Suggerimentu: aghjunghje l'eluente pre-riscaldatu à 65℃goccia a goccia à u mità di a membrana di gel di silice, è lasciate à a temperatura di l'ambienti per 5 minuti per aumentà l'efficienza di l'eluzione.

Estrazione per ottene DNA genomicu à pocu rendimentu

1. L'esemplariu hè impropriamente guardatu o guardatu per troppu longu, risultatu in a degradazione di l'ADN genomicu.

Raccomandazione: Store samples tissue à -20℃;pruvate d'utilizà campioni di tissuti appena raccolti per l'estrazione di DNA genomicu.

2. Se a quantità di mostre di tissuti hè troppu chjuca, l'ADN genomicu extracted serà menu.

Suggerimentu: Certi campioni di pianta sò ricchi d'acqua, cum'è e piante acquatiche cum'è l'alga, etc., a dosa pò esse aumentata in modu adattatu o l'acqua pò esse desidratata un pocu prima di l'operazione.

3. I campioni ùn sò micca stati bè cù nitrogenu liquidu o sò stati lasciati à a temperatura di l'ambienti per troppu longu dopu a macinazione.

Suggerimentu: U grinding di nitrogenu liquidu deve esse abbastanza, è u muru di a cellula di mostra deve esse rottu quantu pussibule;subitu dopu à a macinazione, u polu di mostra deve esse trasferitu à 65℃Buffer PL1 preriscaldatu per u passu prossimu.

4. Ùn aduprà u kit currettu.

Raccomandazione: Aduprate un Kit d'isolazione di DNA vegetale dedicatu per estrae è purificà l'ADN genomicu di a pianta.

5. L'almacenamiento impropriu di Foregene Protease risultati in attività ridutta o inattivata.

Raccomandazione: Cunfirmà e cundizioni di almacenamento di Foregene Protease o rimpiazzà cù una nova Foregene Protease per l'idrolisi enzimatica.

6. Prublemu eluenti

Raccomandazione: Per piacè utilizate Buffer EB per l'eluzione;si usa ddH₂O o altri eluenti, assicuratevi chì u pH di l'eluente hè trà 7,0-8,5.

7. L'eluente ùn hè micca dripped correctly

Suggerimentu: Per piacè aghjunghje a goccia d'eluzione à u mità di a membrana di silice è lasciate à a temperatura di l'ambienti per 5 minuti per aumentà l'efficienza di l'eluzione.

8. U vulume eluent hè troppu picculu

Suggerimentu: Aduprate l'eluente per l'eluzione di DNA genomicu secondu l'istruzzioni, almenu micca menu di 100μl.

DNA genomicu estratto cù purezza bassa

A bassa purità di l'ADN genomicu portarà à u fallimentu o un effettu poviru di esperimenti downstream, cum'è: l'enzima ùn pò micca esse tagliata, è u fragmentu di u genu di destinazione ùn pò micca esse acquistatu da PCR.

1. Cuntaminazione di prutezione diversi, contaminazione di RNA.

Analisi: Buffer PW ùn hè micca usatu per lavà a colonna;U buffer PW ùn hè micca usatu per lavà a colonna à a velocità di centrifugazione curretta.

Suggerimentu: pruvate à assicurà chì ùn ci hè micca precipitazione in u supernatant quandu u supernatant hè passatu per a colonna;assicuratevi di lavà a colonna di purificazione cù Buffer PW secondu l'istruzzioni, è questu passu ùn pò micca esse omessi.

2. Contaminazione di ioni impurità.

Analisi: A colonna di lavatura di Buffer WB hè stata omessa o solu lavata una volta, risultatu in una contaminazione ionica residuale.

Raccomandazione: Assicuratevi di lavà duie volte cù Buffer WB secondu l'istruzzioni per caccià ioni residuali quantu pussibule.

3. Cuntaminazione RNase.

Analisi: RNase esogenu hè aghjuntu à u Buffer;L'operazione di lavaggio incorrecta in Buffer PW risulterà in RNase residuale è influenzerà l'operazioni sperimentali di RNA in aval, cum'è a trascrizione in vitro.

Suggerimentu: I kit di estrazione di l'acidu nucleicu di a serie Foregene ponu caccià l'RNA senza RNase supplementari, è tutti i reagenti in u Kit d'isolazione di DNA di a pianta ùn anu micca bisognu di RNase;assicuratevi di lavà a colonna di purificazione cù Buffer PW secondu l'istruzzioni, è questu passu ùn pò micca esse omessi.

4. Residui di etanolu.

Analisi: Dopu avè lavatu a colonna di purificazione cù Buffer WB, ùn hè stata fatta una centrifugazione di tubu viotu.

Raccomandazione: Segui l'istruzzioni per una centrifugazione curretta di tubi vioti.

Manuale d'istruzzioni:

Manuale di istruzioni per l'isolamento di DNA vegetale