W: Fratellu, a trascrizione inversa hè finita, è infine l'ultimu passu - PCR quantitative fluorescente!Ehi, fratellu, chì hè a PCR quantitativa in tempu reale?
M: PCR sapete sempre, nò?
W: Sapete, a PCR hè a reazione in catena di polimerasi, è hè una tecnulugia chì aumenta l'ADN!
M: Hè quasi... Hè un metudu tècnicu per amplificà a sequenza di destinazione à più di un milione di volte per mezu di primers specifichi, ma questu solu indica a presenza o l'assenza di a sequenza di destinazione, è ùn pò micca determinà a quantità di u mudellu iniziale.A PCR quantitativa di fluorescenza hè un metudu tecnicu sviluppatu per risolve stu prublema.A PCR in tempu reale è a PCR di quantità (qPCR) si riferiscenu in generale.
W: A diferenza da a PCR ordinaria si trova in a quantificazione di fluorescenza?
M: Iè, vale à dì, in a fase di estensione di ogni ciculu PCR, l'intensità di u signale di fluorescenza hè rilevata, è a quantità iniziale di u mudellu pò esse calculata secondu u cambiamentu di l'intensità di u signale.
W: Sembra cusì complicatu!Aghju da calculà questu per mè stessu?
M: Questu ci vole à amparà pianu pianu, hè megliu per pudè capisce u principiu.Avà pudete fucalizza nantu à u valore CT prima, chì hè una data sperimentale relativamente intuitiva, è a so dimensione currisponde à a dimensione di a quantità iniziale di u mudellu.Ci sò ancu grafici cum'è curve di amplificazione è curve di fusione.Hanu l'ultima parolla nantu à se u vostru esperimentu hè successu o micca.
W: Oh, fratellu.Allora aghju da fà l'esperimentu qPCR !
M: Prestate una attenzione speciale per ùn aghjunghje mudelli à l'area di reagenti, altrimenti u vostru mischju inutilizatu serà facilmente contaminatu!
W: Capitu!

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