A caratteristica eccezziunale di a reazione PCR hè a so grande capacità di amplificazione è a sensibilità estremamente alta.Per migliurà u rendiment di a PCR è l'efficienza di deteczione, simu impegnati à migliurà a capacità di amplificazione PCR è a sensibilità di rilevazione, ma u mal di testa hè in u prucessu di l'esperimentu.I falsi pusitivi sò spessu, è una quantità assai chjuca di cuntaminazione incruciata di mostra o contaminazione di u produttu PCR pò causà falsi pusitivi in l'esperimentu.
Cinque tippi di contaminazione di u produttu PCR
Ci hè parechje motivi per a contaminazione di PCR, chì ponu esse divisu in e seguenti categurie:
A contaminazione di l'esemplari hè principalmente causata da a contaminazione di u cuntinuu per a cullizzioni di l'esemplari, o quandu u specimenu hè postu, hè scappatu fora di u cuntinuu per via di un sigillamentu soltu, o u specimenu hè aderitu à l'esternu di u cuntinuu, chì provoca a contaminazione cruciata;A cuntaminazione porta à a contaminazione trà i specimens;certi specimens microbiali, in particulare i virus, ponu sparghje cù aerosols o formanu aerosols, risultatu in una contaminazione mutuale.
U mutivu principale hè chì durante a preparazione di reagenti PCR, a pistola di mostra, u containeru, l'acqua distillata doppia è altre suluzione sò contaminati da u mudellu di l'acidu nucleicu PCR.
In i laboratorii di biologia moleculare è certi laboratorii chì utilizanu plasmidi clonati cum'è cuntrolli pusitivi, u prublema di a contaminazione di plasmidi clonati hè ancu cumuni.Perchè u cuntenutu di u plasmidi di clonazione in u voluminu di l'unità hè abbastanza altu, è più strumenti è reagenti sò necessarii in u prucessu di purificazione, è u plasmide in i celluli viventi hè assai prubabile di esse contaminatu per via di a forte crescita è a capacità di ripruduzzione di e cellule viventi.
A contaminazione di i prudutti amplificati hè u prublema di contaminazione più cumuni in e reazzioni PCR.Perchè a quantità di copia di u pruduttu PCR hè grande (in generale 1013 copie / ml), chì hè assai più altu ch'è u limitu di u numeru di copia di rilevazione PCR, una quantità assai chjuca di contaminazione di u produttu PCR pò causà falsi pusitivi.
A contaminazione di l'aerosol hè a forma più prubabile di contaminazione di i prudutti PCR, è hè ancu a più faciule per esse trascurata.Hè furmatu da a friczione trà a superficia liquida è l'aria.In generale, a contaminazione di l'aerosol pò esse furmatu quandu a tapa hè aperta, quandu a mostra hè aspirata, o ancu quandu u tubu di reazzione hè agitatu vigorosamente.Sicondu i calculi, una particella aerosol pò cuntene 48 000 copie, cusì a contaminazione causata da questu hè un prublema chì meriteghja una attenzione particulari.
In particulare, i laboratorii di teste utilizanu spessu u listessu paru di primers per pruvà un certu genu.À u tempu, una grande quantità di cuntaminazione di u produttu PCR accadirà in u spaziu di u laboratoriu.Una volta tali contaminazione si trova, hè difficiule di eliminà in pocu tempu.
Per i primi trè tippi di contaminazione, pudemu usà i mezi efficaci per evitari, ma a contaminazione causata da i prudutti PCR hè difficiule di prevene, soprattuttu in a custruzzione di laboratori PCR non standard.In u prucessu di PCR, quandu a punta di a pipetta succhia è soffia u liquidu, è a tappa di u tubu PCR hè apertu, un aerosol serà furmatu.E molécule d'ADN purtate da l'aerosol (un aerosol pò purtà decine di millaie di DNA) sò difficiuli di eliminà perchè flotanu in l'aria.Una volta chì a prossima volta di esperimenti di PCR hè stata introdotta, i falsi pusitivi saranu inevitabbilmente.
Comu mostra in a figura sottu, u cuntrollu negativu hà ancu amplificatu a banda d'interessu currispondente:
A prima parte di sta questione di a contaminazione è a prevenzione PCR hè introdutta quì.U prossimu numeru vi purterà a seconda parte "Prevenzione di a contaminazione di i prudutti di a PCR", cusì stà cunnessu !
Postu tempu: Jul-25-2017
